可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA的制备.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA的制备.pdf

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生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 9 研究报告年第期可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA 的制备 1，2 2 1 3 1 李晓玲李克秀赵洪锟赵茂林董英山 1 2 ( ， 130033 ; ， 1300 12 ; 吉林省农业科学院生物技术研究中心长春长春工业大学化学与生命科学学院长春 3 ， 100 10 1) 中国科学院遗传与发育生物学研究所北京 : (TAC)pYLTAC747NH / sacB DNA 。摘要对可转化人工染色体文库载体的制备条件进行了较系统的摸索和研究结，、QIAGEN Plasmid Mini kit ， DNA 。 DNA 果表明该文库载体经碱裂解法提取纯化后可获得较纯净的载体对其闭环载体分别 Hind III ， Hind III 2 U Hind III / g DNA 、用不同酶量的酶切处理经琼脂糖凝胶电泳检测得出其最佳完全酶切条件为 μ 闭环载体 37 ℃ 30 min ; 0 ． 5 MBU 1 MBU HK / g DNA ，酶切分别用和脱磷酶 μ 对其线性载体进行脱磷处理经电泳和载体自连产物电转化 1 MBU HK / g DNA ，30℃ 1 h ; DNA DNA / 检测表明其适宜的完全脱磷条件为脱磷酶 μ 线性载体脱磷将所制备的线性载体与λ Hind III ，， DH10B