米黑根毛霉脂肪酶基因的克隆、表达及其活性分析.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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米黑根毛霉脂肪酶基因的克隆、表达及其活性分析.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2013 6 米黑根毛霉脂肪酶基因的克隆、表达及活性分析 1 1 1 1 1 苗长林罗文刘姝娜吕鹏梅李惠文 1 1 2 杨玲梅袁振宏蒋剑春（1. 中国科学院广州能源研究所中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室，广州 510640 ；2. 中国林业科学研究院林产化学工业研究所，南京 210042）摘要：以米黑根毛霉（）为出发菌株，采用UNIQ-10 柱式Trizol 总RNA 抽提试剂盒提取其总RNA ，反转录- Rhizomucor miehei 聚合酶链式反应（RT-PCR ）扩增出米黑根毛霉脂肪酶（RML ）结构基因。构建真核重组表达质粒RML-pPIC9K ，电转化His+ 缺陷型巴斯德毕赤酵母（）GS115 ，利用MD-MM 平板及PCR 方法筛选和鉴定出重组子，进行甲醇诱导表达。结果表明， Pichia pastoris RML 基因能够在巴斯德毕赤酵母中实现高效表达。重组子发酵液经SDS分析显示获得了与预期大小（约39 kD ）一致的蛋白表达特异条带，用NaOH 滴定法测其活性，酶活可达84 U/mL。关键词：米黑根毛霉脂肪酶毕赤酵母基因克隆基因表达 Cloning，Expression and Activity Analysis of Lipase Gene from Rhizomucor miehei 1 1 1 1 1 ü Miao Changlin Luo Wen Liu Shuna L Pengmei Li Huiwen 1 1 2 Yang Lingmei Yuan Zhenhong Jiang Jianchun （1. Key Laboratory of Renewable Energy and Gas Hydrate ，Guangzhou Institute of Energy Conversion ，CAS ，Guangzhou 510640 ； 2. Institute of Chemical Industry of Forest Products ，CAF ，Nanj ing 210042 ） Abstract: Lipase gene cDNA fragment from Rhizomuc