小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及其mESC脂质体悬浮转染条件的优化.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及其mESC脂质体悬浮转染条件的优化.pdf

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生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 11 研究报告年第期小鼠KGF 基因毛囊特异性表达载体的构建及 mESC 脂质体悬浮转染条件的优化梁伟肖红高笑宇杜晓媛汪慧郭旭东刘东军 ( ， 0 10021) 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特 : (KGF) pCDsR-UKA ，摘要旨在构建小鼠角质细胞生长因子真核表达载体通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞 (mESC)，， KGF ES 。 RT- 并进一步优化其转染条件最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转基因的细胞利用 PCR KGF cDNA pCDsR-UKA (6． 6 kb)， DNA 技术扩增小鼠基因并构建表达载体经鉴定正确的重组质粒用脂质体包裹后转染mESC 。从小鼠成纤维细胞cDNA 扩增出891 bp 的KGF 基因片段与UHS 启动子和BGH polyA 序列成功重组到pCDsRed2 。 DNA ， DNA KGF 。，mESC 载体中经酶切和测序验证插入载体的片段为基因且方向正确采用脂质体法优化转染条件最高转染效率达到(34 ． 4 ± 4 ． 1)% 。 G4 18 ES PCR ES 。经筛选的转基因细胞通过鉴定证实外源基因已整合在细胞基因组中成 KGF ， pCDsR-UKA ，， DNA 功获得了小鼠基因片段以及真核表达载体经优化的脂质体悬浮法转染条件在六孔板中当与脂质体 3∶ 10 ， ES ， ES 。比例为时可获得最佳转染效率且不改变细胞的生长状态经筛选获得了转基因细胞克隆为下一步通过四倍 ES ES 。体补偿技术获得小鼠