绵羊卵丘细胞中基因表达和卵母细胞发育能力的关系.pdf

本文是自治区科技支疆项目 《肉羊快繁技术与分子标记的高效集成》 国家转基因重大专项 《优质转基因(MSTN，FS)肉绵羊新品种培育》 (20 13ZX08008．003) 部分研究成果 新疆畜牧科学院中国．澳大利亚绵羊育种研究中心 万方数据 绵羊卵丘细胞中基因表达与卵母细胞发育能力的关系 摘要 在卵泡中，卵丘细胞与卵母细胞紧密连接形成卵丘卵细胞复合体(cumulus-oocytecomplexs， COCs)，并参与调控卵母细胞基因组的转录活性。卵丘细胞的旁分泌信号途径调控着卵母细胞的减 数分裂进程，其中基因表达特征能够影响卵母细胞的健康和发育能力，反之亦然。本研究以成年羊 不同卵泡直径、BCB筛选以及羔羊对外源激素敏感性不同卵泡I内COCs经体外成熟培养后的卵丘细胞 结合卵母细胞的孤雌激活胚胎及体外受精后的卵裂率和囊胚率，分析以上基因的mRNA表达量与卵 母细胞发育潜能的关系。结果如下： (1)随卵泡直径的增加，基因的表达量和卵裂率囊胚率均升高。在绵羊卵泡不同直径(小卵泡 2 mm，中卵泡2．5mm，大卵泡5ram)获得COCs经体外成熟培养后，定量分析卵丘细胞中FSHR、 CYPl9A基因的表达量呈现递增趋势，大卵泡中的表达量显著高于中，小卵泡。AMH基因表达量在 大卵泡卵丘细胞中有所下降。COCs体外培养结果表明：不同卵泡直径组间卵母细胞成熟率差异不 显著；卵裂率随着卵泡直径的增大而增加，大卵泡组显著高于中小卵泡组(JP0．05)，小卵泡与中 卵泡组之间无差异(尸0．05)；囊胚率随卵泡直径的增大而升高，大卵泡组显著高于中卵泡组妒O．05)， 极显著高于小卵泡组(P0．01)。 在卵丘细胞中的表达量差异。卵母细胞进行孤雌激活，统计卵裂率和囊胚率。结果表明：六个基因 卵裂率显著高于BCB．组，囊胚率极显著高于BCB．组(尸0．01)。 (3)六个基因在高敏感性羔羊卵泡中的表达量显著高于低敏感性羔羊。用外源激素FSH处理 COCs，以成年羊COCs为对照组。经体外成熟培养24h，定量分析六个基因在卵丘细胞的表达量， 卵母细胞进行体外受精，统计卵裂率和囊胚率。结果表明：六个基因在低敏感性羔羊组卵丘细胞中 l 万方数据 于低敏感性羔羊。体外受精后，高敏感性羔羊组的卵裂率和囊胚率极显著高于低敏感性羔羊组 (尸0．01)。两种羔羊组卵裂率和囊胚率均极显著低于对照组(尸0．oo。 CYPl9A、AMH基因，对其卵母细胞具有更好的发育潜能，说明这些基因的表达量可作为非伤害卵 母细胞的选择标志物的一个方面。同时，也表明这些基因在卵丘细胞中的表达影响着卵母细胞在胚 胎期的发育潜能。 关键词：绵羊；卵丘细胞；卵母细胞；RT-qPCR II 万方数据 Theeffectof the incumuluscelloninvitro geneexpression of from developmentcapacity oocytessheep Abstract Inthe cellsare connectedwiththe inthe follicle，cumulus intimately oocytecumulus-oocyte and modulatethe inth