一种检测大鲵致病性嗜水气单胞菌的四重PCR法.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 9 一种检测大鲵致病性嗜水气单胞菌的四重 PCR 法 凌空  丁诗华  金娟  吴兴镇  （西南大学动物科技学院 水产科学重庆市市级重点实验室，重庆 400715） 摘 要 ： 建立一种快速诊断致病性嗜水气单胞菌的PCR 法。根据嗜水气单胞菌的 16S rDNA、外膜蛋白、溶血素及丝氨酸蛋 白酶基因设计4 对引物，经PCR 反应条件优化后进行检测。结果表明，仅嗜水气单胞菌呈阳性，其检测敏感性高，可检测100 fg 的DNA 模板。20 株大鲵源嗜水气单胞菌经四重PCR 法检测时，有18 株呈阳性。其中，毒力基因种类较多的阳性菌株经人工感染 试验和胞外产物活性检测时显示出较高的致病性。利用该PCR 法进行的其他检测中，还发现33 份人工感染样本全部呈阳性，34 份疑似样本有21 份呈阳性，说明四重PCR 法可应用于临床检测。本研究建立的四重PCR 法具有高度敏感性和特异性，可用于嗜 水气单胞菌快速诊断。 关键词 ： 大鲵 嗜水气单胞菌 毒力因子 PCR Detection of Pathogenic Aeromonas hydrophila in Andrias davidianus by Quadruple PCR Ling Kong Ding Shihua Jin Juan Wu Xingzhen （Key Laboratory of Aquatic Science of Chongqing ，College of Animal Science and Technology ，Southwest University ，Chongqing 400715 ） Abstract: In order to develop a rapid PCR method to detect pathogenic Aeromonas hydrophila in Andrias davidianus , four pairs of primers were designed based on the conservative sequences of 16S rDNA, outer membrane protein（omp）, hemolysin（hly）and serine protease（ahp）genes. By optimizing of PCR conditions, a quadruple PCR assay was established. The assay had a highly specific detection on pathogenic strains of Aeromonas hydrophila without other irrelative bacteria. This assay had a high sensitivity with the detection limit as low as 100 fg DNA template. From quadruple PCR assay, there were 18 positive results in （ = 20）. After artificial infection Aeromonas hydrophila n of Andrias davidianus and the extracellular products assay, the positive strains with more species of virulence genes showed a