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生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期
2014 2
无乳链球菌诱导吉富罗非鱼分泌型免疫球蛋白 M
（sIgM ）重链基因的克隆及原核表达
1，2，3 1，2，3 1，2，3 1，2，3 1，2，3
王培 鲁义善 王蓓 汤菊芬 蔡佳
吴灶和2，3，4 简纪常1，2，3
（1. 广东海洋大学水产学院，湛江 524088 ；2. 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室，湛江 524088 ；3. 广东省水产经济动
物病害控制重点实验室，湛江 524088 ；4. 仲恺农业工程学院，广州 510225）
摘 要 ： 以灭活的无乳链球菌 （ ）诱导后的吉富罗非鱼 （ ）为材料，构建其头肾
Streptococcus agalactiae Oreochromis niloticus
SMART cDNA 文库，应用同源性克隆和RACE-PCR 技术克隆到吉富罗非鱼 （ ）分泌型免疫球蛋白M （sIgM ）重链基因
O. niloticus
的全长cDNA 序列并对其进行生物信息学分析。sIgM 基因cDNA 全长为1 92 1 bp ，开放阅读框 （ORF ）为1 740 bp ，5端非编码区
（5-UTR ）4 1 bp ，3端非编码区（3-UTR ）140 bp ，编码579 个氨基酸，N 端有信号肽结构。预测分子量 （MW ）为64.26 kD ，理
论等电点（pI ）为5.36。系统进化树分析显示，吉富罗非鱼（ ） 与牙鲆（ ）和军曹鱼（
O. niloticus sIgM Paralichthys olivaceus Rachycentron
）的亲缘关系较近。 基因有4 个恒定区。将吉富罗非鱼 （ ） 基因恒定区序列克隆到原核表达载体pET-
canadum sIgM O. niloticus sIgM
28a （
+ ）中，构建原核表达质粒pET28-sIgM ，诱导表达后确定最优条件为37 ℃条件下，IPTG 浓度为0.05 mmol/L 时诱导4 h 蛋白
表达量最大。纯化蛋白后经Western blot 分析，sIgM 融合蛋白与鼠抗His-Tag 发生特异结合，表明目的蛋白成功表达。
关键词 ： 吉富罗非鱼 免疫球蛋白M
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