Tgf2转座子多克隆位点的克隆及表达.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 2 Tgf2 转座子多克隆位点的克隆与表达 1，2 2 2 2 2，3 2，3 1 陶然   常玉梅  梁利群  唐然  窦新杰   王楠   李明云 （1. 宁波大学海洋学院，宁波 315211 ；2. 淡水鱼类育种国家地方联合工程实验室 农业部淡水水产生物技术与遗传育种重点实验室 中国水 产科学研究院黑龙江水产研究所，哈尔滨 150070 ；3. 上海海洋大学 水产与生命学院，上海 201306） 摘 要 ： 以金鱼pTgf2-EF1α-EGFP 转座子为基础，构建含有多克隆位点 （Multiple cloning sites ，MCS ）序列以及外源目的基 因肌醇-3-磷酸合成酶 （Myo-inositol-3-phosphate synthase ，MIPS ）的重组表达载体并注射到斑马鱼1-2 期受精卵，检测重组表达载 体pTgf2-EF1α-MCS-EGFP 和pTgf2-EF1α-MCS-MIPS-EGFP 在斑马鱼中绿色荧光蛋白基因（ ）的表达情况以及外源基因 EGFP MIPS 在斑马鱼体内的整合情况。荧光观察结果显示，两个重组载体均不影响EGFP 的表达，只是表达强度存在一定差异，表明对Tgf2 转座子的改造是有效的。转基因斑马鱼PCR 检测结果显示，靶基因MIPS 的编码区能够完整地整合到斑马鱼基因组中，整合效率 达31.4%。重组表达载体的成功构建显示金鱼Tgf2 转座子可以介导外源基因在斑马鱼中的表达，为以后Tgf2 转座子在鱼类基因功 能研究方面奠定了基础。 关键词 ： 金鱼 Tgf2 转座子 MCS 序列 转基因斑马鱼 Tgf2 Transposon Multiple Cloning Sites Cloning and Expression 1，2 2 2 2 2，3 2，3 1 Tao Ran Chang Yumei Liang Liqun Tang Ran Dou Xinjie Wang Nan Li Mingyun （1. College of Ocean ，Ningbo University ，Ningbo 315211 ；2.China National Local United Engineering Laboratory of Freshwater Fish Breeding ，Key Laboratory of Freshwater Aquatic Biotechnology and Genetic Breeding ，Ministry of Agriculture ，Heilongj iang River Fisheries Research Institute ，Chinese Academy of Fishery Sciences ，Harbin 150070 ；3. College of Fisheries and Lif e Science ，Shanghai Ocean