双效表达载体的构建及U6启动子的功能效率鉴定.pdfVIP

生物技术通报 BIO TE CHN OLOG Y B ULLETIN 2009 4 U6 1, 2 2 1 1 2 项海涛 杨彬 温峰琴 胡永浩 柳纪省 1 2 ( , 730070; , , 730046) : 利用 pBudcE41双表达载体构建 shRNA 与蛋白共表达载体, 为双效疫苗 研制提供新 研究思路以 含 U6启动子 载体为模板, PCR 扩增得到 U6启动子, 用其置换载体 pBudcE41 内 CMV 启动子 核心部分构建 shRNA与蛋白共表达载体用干扰绿色荧光蛋白表达 方法鉴定重组载体中 U6启动子能否启动 shRNA 表达 经 PCR扩增双酶切鉴定及 DNA测序证明成功构建了载体 pBudcE41U6用干扰载体 pBudcE41U6e FPshRNA 与 含 e FP 载体共转染 293T细胞后, 荧光显微镜观察显示 e FP 表达量下降; 流式细胞仪检测细胞 转染效率降低 研究结果证明U 6启动子正常发挥作用成功构建 RNA i与蛋白共表达载体, 为利用该载体研制动物双效疫苗奠定了 基础 : RNA i 共表达载体 U6启动子 构建 鉴定 Construction of Doubleeffect Vector and Function Identification ofU6 Promoter 1, 2 2 1 1 2 X iangHaitao Yang Bin W en Fengqin HuYonghao Liu Jixing 1 2 ( Anmi alMedicine College, GansuAgricultural University, Lanzhou 730070; StateK ey Laboratory E tiological iology, K ey Laboratory of Anmi al Virology of M inistry of Agriculture, K ey Laboratory of Graz ingA nimalDiseases of M inistry of Agriculture, Lanzhou Veterinary R esearch Institute, ChineseAcademy of Agriculture Sciences, Lanzhou 730046) Abstrac:t The coexpression vector pBudcE41was used to construct to express shRNA and protein smi ultaneouslyU6 promoter was amplified by PCR using plasm id containing U6 promoter as template, and the core section of CMV promoter of pBudcE41was substituted for U6 promoter The plasm id pBudcE41U6 was