仲景方调节胃肠起搏细胞实验平台的建立.pdfVIP

实验研究 ．329． 一实验研究一 仲景方调节胃肠起搏细胞实验平台的建立· 王庆国李宇航黄颖 (北京中医药大学北京100029) 《伤寒论》一书出自东汉时期的张仲景，是一部集理、法、方、药于一身的 伟大著作。书中确立了许多行之有效的方剂。现代实验研究证明，仲景的许多方 药在促进胃肠动力方面有较显著效果。如：半夏泻心汤、大承气汤、理中汤、四 逆散、旋覆代赭汤等。近年来对中药复方调节胃肠动力机制的研究主要分为神经 调节和脑肠肽调节等途径。神经调节方面发现兴奋胆碱能神经受体、抑制肾上腺 能神经受体是其主要机制，而脑肠肽调节主要与胃肠激素有关，研究主要集中在 (PGE)等方面进行。但是从研究中也暴露出许多问题，如研究环节单一，对胃 肠电活动、胃肠平滑肌细胞离子通道和信号转导的靶点缺乏深入研究，阐明其始 动机制，这样的报道还很少。 我们在以往研究半夏泻心汤的基础上，从胃肠起搏细胞为切入点，进一步深 入研究半夏泻心汤调节胃肠运动的机制。同时，通过在国内比较早的成功分离、 培养ICC，以及中药血清药理学方法的运用，应用激光共聚焦显微扫描技术和特 异性荧光探针标记的方法，成功建立起一套研究中药复方对胃肠起搏细胞作用的 实验方法，为仲景调节胃肠动力方药在此领域的继续研究建立了一个比较稳定的 细胞实验平台。下面将我们的工作汇报如下。 l平台构建的理论基础 1．1ICC与胃肠运动 1893年，西班牙神经解剖学家Cajal用甲基蓝及嗜银染色法在胃肠道神经系 nervous 统(enteric system，ENS)中观察到一类特殊的间质细胞，命名为Cajal Cells 间质细胞(Interstitial 关的特殊间质细胞…。胃肠道运动的形式在很大程度上取决于ICC的内在活动。 胃肠道蠕动运动和心脏相似，具有自动节律性。它主要受四种因素的调节：肠道 神经系统、平滑肌本身、体液调节和ICC。前三者和其他脏器的神经及体液调节 大同小异，唯有ICC为胃肠道所特有。 ICC与胃肠起搏胃肠道运动包含着非常复杂的过程，最重要的部分是细胞膜 电活动变化引起的胃肠道平滑肌细胞的收缩。许多研究表明，在胃肠道平滑肌细 wave，SW)， 胞内记录到的一种膜电位自发、缓慢的节律性去极化波，即慢波(slow 又称“基本电节律”(BRE)，类似于心脏的窦房结区起搏细胞。源于ICC的慢波 15) ’基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金瓷助项目tNo．200400260 -330-仲景区学求真 可以通过ICC网络及与之相连的平滑肌传播，产生与调节平滑肌节律性收缩活动， 决定着平滑肌细胞的收缩节律，调控胃肠运动发生的时间、地点、频率和方向。 目前已知，胃肠运动功能的正常发挥，除依赖平滑肌的结构与舒缩功能完好及神 经．胃肠激素的调节外，实际上还需有ICC的参与。ICC作为壁内神经信息向平滑 肌传送的中转站，对有关信号起整合作用。因此，ICC结构完好、分布及功能正 常，对胃肠动力的发生和功能调控至关重要【zJ。 1．2激光共聚焦扫描显微镜和荧光探针 1．2．1激光共聚焦扫描显微镜 lasers 激光共聚焦扫描显微镜(confocal scanning 纪80年代发展起来的先进的分子细胞生物学分析仪器。它在荧光显微镜成像基础 上加装了激光扫描装置，利用计算机进行图像处理，把光学成像的分辨率提高了 30％40％，是光学显微镜发展史上的重大突破。它通过其独特的成像原理和技 术【31，使用紫外线或可见光激发荧光探针，不仅可观察固定的细胞、组织切片， 还可以对活细胞的结构、分子、离子等进行实时动态观察和检测，在亚细胞水平 上观察诸如Ca2+、PH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化，成为形态学、 分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工具 【4】。总而言之，激光扫描共聚焦