原代培养神经元类缺血再灌后UCP4的表达和ROS的关系及其前列地尔干预研析.pdfVIP

山西医科大学硕士学位论文 干预的研究 摘要 目的：以原代培养神经元为研究对象，建立类缺血再灌注损伤模型，探讨原代培养神 经元类缺血再灌后UCP4的表达与细胞内活性氧水平的变化及前列地尔对其影响。 下分离皮质并剥离脑膜，将脑组织剪碎后用胰酶消化，后经过滤，离心，调整细胞浓度， 养箱中培养，48h后加阿糖胞苷以抑制非神经元过度增殖，以后每三天半量换液，并采用 全培养基。放入5％C0。的培养箱内。3、实验分组：将体外培养lOd的大鼠皮质神经元细胞， 随机分为正常对照组(正常组)、类缺血再灌注组(缺血组)、类缺血再灌注加前列地尔组 (实验组)。正常组正常条件培养，缺血组按上述模型建立，然后转入正常条件下继续培 养3h、6h、12h分别取出细胞进行实验；实验组在类缺血再灌注模型基础上于缺血前加 经细胞的盖玻片，经冷冻的无水酒精固定，用UCP4一抗按SP法进行免疫细胞化学染色。 5、流式细胞仪检测细胞内活性氧。6、统计学处理：数据均以均数±标准差表示，进行单 因素方差分析、SNK法检验及两因素相关分析，PO．05为有统计学意义。 结果：通过原代神经元培养的方法，培养出了可供实验的原代神经元，并在此基础上 成功建立了类缺血再灌注模型。免疫细胞化学染色显示类缺血再灌3h时UCP4的表达即降 低，随着时间延长，其表达持续降低，与正常组比较在各时间点上均有差别(PO．05)， h、6h、12h三 尤以再灌后6h、12h时降低明显(P0．01)。对细胞内活性氧，在再灌注3 地尔干预组)在再灌后不同时间点UCP4的表达较类缺血再灌组均升高，同时ROS的含量亦 降低(P0．05)。与正常组比较在再灌后不同时间点亦有统计学差异(P0．05)。 h时UCP4 结论：UCP4在类缺血再灌注后不同时间点的表达呈动态变化，在再灌注3 了UCP4可能参与了脑缺血再灌注损伤的病理过程；UCP4的表达变化可能影响细胞内活性 氧的水平；前列地尔可能通过上调UCP4的表达减少了细胞内活性氧的产生，从而发挥保 护神经细胞的作用。 关键词：解耦联蛋白4， 脑缺血再灌注，原代培养神经元，活性氧，前列地尔 山西医科大学硕士学位论文 betweenthe ofUCP4andROSafter Relationship expression · - ● l·· 矗 ● ● ● l· l 1■ in CnItureorat’snenrons ischemia-liRe-reperlUsionDrlmary wellastheinterventionaleffectof as alprostadil Abstract wasmadeon culturedratsneurons．To objective：ischemia·like-reperfusionprimary study the ofthe ofUCP4andthe ROSin culturedrat’Scortical changesexpression levelof primary neuronsinduced andtheinterventionaleffectof