表皮生长因子对POAG小梁网细胞增殖和凋亡的影响及和高眼压形成的关系.pdfVIP

表皮生长因子对原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖和凋亡 的影响及其与高眼压形成的关系 中文摘要 目的 探讨体外培养原发性开角型青光眼（POAG）小梁网细胞的培养方法及 其生物学特性，并在此基础上研究原发性开角型青光眼小梁网细胞是否表达表皮 生长因子（EGF）及其受体（EGFR），EGF 对 POAG 小梁网细胞增殖和凋亡的影响 及EGF 对小梁网细胞表达EGFR 的影响。 方法 采用组织块培养法进行POAG 小梁网细胞的体外培养，用倒置显微镜、 透射电镜、免疫细胞化学法染色等方法观察体外培养的 POAG 小梁网细胞生物学 特性并进行细胞鉴定。采用ELISA 法检测体外培养的POAG 小梁网细胞是否表达 EGF 及 EGFR；采用 CCK-8 法和流式细胞术检测体外培养的第 5 代小梁网细胞经 EGF 终浓度分别为 0ng/ml（对照组），5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml 和 100ng/ml的DMEM/F12 处理48 小时后小梁网细胞的增殖率和凋亡率；ELISA 法检 测小梁网细胞经EGF 终浓度为0ng/ml，50ng/ml 的DMEM/F12 处理48 小时后小梁 网细胞EGFR 的表达。 结果 1.组织块培养 10 天左右可见细胞从其边缘向外生长，透射电镜、免疫细胞 化学染色证明其为POAG 小梁网细胞。 2．ELISA 检测结果显示小梁网细胞表达EGF 和EGFR，其ELISA 检测的吸光 度值（OD 值）分别为0.13、0.33，计算出POAG 小梁网细胞培养上清液中EGF 及 EGFR 的表达量分别为 1.25ng/ml 、0.89ng/ml。 3.运用 CCK-8 法对经 EGF 终浓度为 0g/ml，5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml， 50ng/ml，100ng/ml的DMEM/F12 处理的实验组细胞进行检测，其吸光度值（OD） 分别为（0.75±0.05），（0.80±0.07），（0.84±0.05），（0.89±0.02），（0.77 ±0.04），与对照组（0.66±0.05）相比，差异有统计学意义（P0.05）。 4．运用流式细胞仪对经EGF 终浓度为0 ng/ml（对照组），5ng/ml，10ng/ml， 20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml的DMEM/F12 处理48h 的细胞进行检测，小梁网细 胞的凋亡率分别为（16.14±0.44）％，（14.22±0.18）％，（10.90±0.49）％， （5.98±0.14）％，（5.58±0.21）％，（9.93±0.17）％,各浓度组与阴性对照 3 组比较，凋亡率下降具有统计学意义（P0.05）。 5.经EGF 终浓度为50ng/m的DMEM/F12 处理的细胞EGFR 的表达量的OD 值为 （0.20±0.01），与阴性对照组的 OD 值（0.17±0.01）相比,差异具有统计学意 义（P0.05）。 结论 l．掌握 POAG 小梁网细胞的体外细胞培养技术及其生长特点、超微结构， 能够成功地进行POAG 小梁网细胞的体外培养及鉴定。 2．体外培养的POAG 小梁网细胞上清液中表达EGF 及EGFR。 3．EGF 能促进小梁网细胞的增殖，减缓其凋亡，并在一定的范围内呈现剂 量依赖性。 4．EGF 能够促进小梁网细胞表达EGFR。 关键词：青光眼,开角型；小梁网；表皮生长因子；表皮生长因子受体 4 Effect of epidermal growth factor on proliferation and apoptosis in cultured primary open-angle glaucoma trabecullar meshwork cells and its relationship with the high intraocular pressure Abstract Objective To