北柴胡糖基转移酶基因bcugt1的表达分析及原核表达及蛋白纯化.pdfVIP

北柴胡糖基转移酶基因bcugt1的表达分析及原核表达及蛋白纯化.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 (8): 1345 1352 ·1345 · 柴胡糖基转移酶基因BcU GT1 的表达分析及其原核表达与蛋白纯化 1, 2 1 1 1, 3 1 1, 2 陶韵文 , 徐洁森 , 魏建和 , 孙 晶 , 徐艳红 , 杨 欣 , 1, 2 2 1* 张 岩 , 刘 娟 , 隋 春 (1. 中国医学科学院、北京协和医学院药用植物研究所, 北京 100193; 2. 佳木斯大学 学院, 黑龙江 佳木斯 154007; 3. 东北林业大学生命科学院, 黑龙江 哈尔滨 150040) 摘要: 本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUG T1 ORF 序列, 预测了其蛋白三维结构, 利用qRT-PCR 分 析了BcUGT1 的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明, BcUGT1 可能参与柴胡皂苷生物合成。随后, 构 建了BcUGT1 原核表达载体, 成功诱导出目标蛋白, 并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3 种载体: pRSET-A、 pET-28a (+) 和pET-30a (+), 3 种宿主菌: BL21 (DE3) plysS 、BL21A1 和BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL, 进行了不同 诱导条件的探索, 包括不同诱导物 (L -阿拉伯糖和IPTG) 的不同浓度、不同诱导时间和温度, 结果以pET-28a (+) 和pET-30a (+) 为载体, BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL 为宿主菌, 0.5 或1 mmol ·L 1 IPTG, 16 ℃, 20 h 为条件, 诱导 出目标蛋白。利用PrepEase® His 标签蛋白纯化试剂盒, 纯化获得了目标蛋白, 为后续开展BcUGT1 基因的功能 研究奠定了基础。 关键词: 北柴胡; UGT 基因; 茉莉酸甲酯诱导表达; 组织表达; 原核表达; 蛋白纯化 中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 13) 08- 1345-08 Expression analysis of glycosyltransferase BcUGT1 from Bup leurum chinense DC. and its expression in E. coli and the target protein purification 1, 2 1 1 1, 3 1 1, 2

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