里氏木霉木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中高效表达的研究.pdf

摘要 摘要 木聚糖是半纤维素中含量最车富的一种组分，在植物细胞壁中的含量仅次于纤维素，约占 细胞干重的35％。它的存在使谷物中的营养物质不能被充分暴露于动物消化液的表面，进而影 响动物的消化吸收，降低了饲料的营养价值。 木聚糖酶(1，4．D．D．xylan 3．2。1．8)通过内切方式水解木聚糖分子中的 xylanohydrlase，EC B．1，4一木糖苷键，水解产物以木寡糖和木二糖为主。随着木聚糖酶在造纸、食品、饲料等领域 的成功应用，它已成为酶制剂产业的一个重要产品，在生物转化、食品、饲料、医药、能源、 造纸、纺织等行业中有着广泛的应用前景。具有很大的商业开发价值。但是目前传统的木聚糖 酶生产方法产量较低，限制了其广泛应用，应用基因工程技术可望解决这一问题。 本研究以里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414菌株为基因供体。克隆木聚糖酶基因 xyn2，分别构建其大肠杆菌表达载体和酵母表达载体，并分别转到大肠杆菌和毕赤酵母中。 进一步对表达的木聚糖酶进行酶学分析，为大规模工业生产和应用奠定基础。 主要研究结果如下： 以木聚糖为诱导剂诱导里氏木霉表达木聚糖酶，确定了最佳诱导时间为72dx时，标准状态 下最大酶活为6．32IU／ml。里氏木霉木聚糖酶最适pH值为4．0，最适温度为50℃。 采用RT-PCR方法克隆到了里氏木霉木聚糖酶基I园xyn2。测序得至Uxyn2基因的序列与 比对，确定-jxyn2基因含有一个内含子。 达。IPrrG诱导5小时，标准状态下最大酶活为42．28IU／ml。对表达的木聚糖酶性质进行了分析， 确定最适pH值为6．5，最适温度为45(2。 208．12IU／ml，比出发菌株酶活提高了约33倍。对重组木聚糖酶性质进行了分析，确定最适pH 值为5．0，最适温度为55℃。 关键词里氏木霉；木聚糖酶；基因克隆；毕赤酵母；表达 IX Abstract -- I _ __ on and ofGene StudyCloningOverexpressionEncoding FromTrichodermareeseiInPichia Endo一13—1，4一xylanase pastoris Abstract iSone is lesscellulosein cellwall。 componentofHemicellulose。which Xylan only plant the isthemost．Becauseof Hemieelluioseisas35％as nutrient dryweight,ofwhichxylan it,the SO canbe fromthesurfaceofanimal thatthe andthe protected digestivejuicedigestionabsorption decreasethenutrientvalue． wereaffected，whi