第九章凝胶过滤及讲解.ppt

  1. 1、本文档共48页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
第九章 凝胶过滤及离子交换层析介质 广东省韶关学院生物科学系 第一节 概 述 自茨维特 1903年发明色谱法以来,该方法已经广泛用于生物分子的分析分离与制备。在蛋白质、多糖、天然产物的分离纯化与除热源等方面得到了广泛的应用。 其中的填料——色谱介质,是决定色谱分离效果的主要、最重要的因素。 目前,各个国家的许多公司,均有专门的色谱出售。有的用于分析效果好,有的适合大规模制备使用。 60年代末,70年代初,高效液相色谱仪的研制成功,使色谱实现机械化、自动化操作,提高了操作的复现性。这类全自动的生产规模级的层析系 统(如 瑞典Pharmacia com.的BioprocessⅠ、),能高速处理大量样品,流速从4-20L/h到40-400L/h,能满足各类规模生产的需要。他们的填料特点是: 1、适用于实验室和大规模生产,重现性高。 2、易清洗、消毒和再生,理化性质稳定,使用寿命长。 3、易装柱,高工作容量,高流速,利于工业化生产。 1975年Small提出了离子交换色谱法,1981年Jorgenson创立了毛细管电泳法。 20世纪90年代后,出现的扩张床吸附技术,通过一步纯化,达到萃取、浓缩和初步纯化的目的,所用的填料是STREAMLINE介质——一种以Sepharose为基架的介质。 2004年GE Healthcare (原安玛西亚公司) 推出的新一代EBA扩张柱STREAMLINE Direct柱,消除了样品和气泡容易堵在筛网下的问题。 各种用于大规模大分子分离纯化生产的色谱方法见表9-1,需注意他们的分离原理、特点和应用。 第二节 凝胶过滤介质 一、凝胶过滤 概念:又称排阻层析或分子筛方法,是利用凝胶网状结构,根据分子的大小和形状,即蛋白质的质量进行分离和纯化的方法。 凝胶过滤的优点: ①介质稳定,不带电,不与溶质反应, 蛋白质不易变性。②适应面广,对各种大小的分子均适用。③设备简单,易操作,耗时少,可连续操作。 常用于脱盐和分级分离。分级分离是将分子大小相近的物质分开,且要选择合适的凝胶,单次上样量小,一般为床柱体积的5%-10%。分子大小彼此相差25%的样品,只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开 二、凝胶介质应具备的条件 优良的凝胶介质是获得良好分离效果的前提,介质必须: 1、惰性材质,不与溶质和溶剂反应。 2、没有或极少的非特异性吸附,提高回收率。消除带电基团。 3、介质内孔径大小分布均匀,孔径分布要窄,才能保证分离效果好。 4、凝胶珠大小均匀,均一性好。细粒填料能提高柱效。 5、机械强度高,易于消毒,能反顾使用。 三、凝胶介质的种类 主要为人工合成大分子和天然多糖类 1、多糖类骨架 这类多糖有纤维素、葡聚糖和琼脂糖 这类介质生物相容性好,亲水性强,不会导致生物分子变性失活。由琼脂糖和葡聚聚合而成的糖新一代复合凝胶——Superdex高效过滤介质,使生产效率进一步提高,从小规模过滤延伸到大规模生产。 2、合成大分子骨架介质 这类介质有聚丙烯酰胺类、聚乙烯醇系和含羟甲基酰胺类等。克服了天然介质易受微生物侵蚀的缺点,保留了多糖骨架亲水的优点。 3、天然大分子与合成高聚物构成混合骨架的介质 既亲水抗微生物侵蚀,又有很好的生物相容性和刚性。 凝胶层析分类 Sepharose FF系列?? Sepharose 6 FF??10000~4000000??45~165微米??质粒、病毒 ??Sepharose 4 FF??60000?45~165微米??病毒,rHBsAg等巨大分子 Sepharose xB(CL-xB)系列?? Sepharose 2B??70000?60-200微米??大分子复合物 ??Sepharose 4B??60000?45-165微米??病毒等大分子 ??Sepharose 6B??10000~4000000??45-165微米??大分子 ?Sephadex G-75 superfine??3000-70000??10-40?? Sephadex G-100??4000-150000??40-120??较大蛋白 的分离 Sephadex G-100 superfine??4000-100000??10-40 Sephadex G-150??5000-300000??40-120??大蛋白的 分离 Sephadex G-150 superfine

文档评论(0)

武神赵子龙 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档