抗vegfr-2全人源igg1抗体的构建及在cho-k细胞中的表达.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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抗vegfr-2全人源igg1抗体的构建及在cho-k细胞中的表达.pdf

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1544 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 ( 10): 1544 1549 · 究论文· VEGFR-2 全人源IgG1 体的构建及其在CHO-k 细胞中的表达 * * 李致科, 何远, 张娟 , 解伟, 曹婉璐, 王泽根, 王旻 ( 中国药科大学天然药物活性组分与药效国家重点实验室, 生命科学与技术学院, 江苏南京 210009) 摘要: 本文在实验室构建的单链抗体-Fc 融合抗体[scFv(AK404R)-Fc] 的基础上构建抗 VEGFR-2 全人源 IgG1 样全长抗体 (Mab-04) 。利用重叠PCR, 获得Mab-04 的轻链和重链的核酸序列后分别克隆到真核表达载体 pcDNA3. 1, 获得重组质粒。脂质体法将重组质粒转染至CHO-k 细胞, 经Protein A 柱纯化细胞培养上清液获得目的蛋白, 利用Western blotting 检目的蛋白, ELISA 检 Mab-04 与抗原亲和力。序表明重组质粒构建成功, Western blotting 检测显示目的蛋白成功表达 (1 μg ·mL 1), ELISA 检测阐明该抗体能与抗原结合并呈浓度依赖性 (IC50 为50 nmol ·L 1), 表明Mab-04 成功表达并正确装配, 为进一步大量制备该抗体及其活性研究打下基础。关键词: VEGFR-2; 全长抗体; 抗肿瘤血管生成中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 13) 10- 1544-06 Construction of anti-VEGFR-2 IgG1 like human antibody and its expression in CHO-k cells * * LI Zhi-ke, HE Yuan, ZHANG Juan , XIE Wei, CAO Wan-lu, WANG Ze-gen, WANG Min (State Key Laboratory of Natural Medicines, College of L ife S cience and Technology, China Pharmaceutical University, Nanj ing 210009, China ) Abstract : Anti-angiogenesis mechanism plays a vital role in tumor targeting immunotherapy. Based on the amino acid sequence of an anti-VEGFR-2 scFv-Fc fusion antibody (AK404R-Fc), this article is aimed to generate an