抗vstm1-v2细胞因子人源化单链抗体文库的构建及其筛选.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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抗vstm1-v2细胞因子人源化单链抗体文库的构建及其筛选.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 13, 48 ( 11): 1651 1656 ·1651 · · 究论文· VSTM1-v2 细胞因子人源化单链抗体文库的构建及筛选 1 2 2 2* 傅晓金 , 张勇侠 , 代云见 , 王明蓉 (1. 四川抗菌素工业研究所, 四川成都 6 10052; 2. 成都生物制品研究所有限责任公司, 四川成都 610023) 摘要: 本文将鼠源VH-CDR3 库 (library of murine VH-CDR3) 移植到特定的人源scFv (single-chain antibody fragment) VH3-VΚ1 框架构建人源化scFv 文库, 快速筛选抗VSTM1-v2 的人源化单链抗体。以抗VSTM1-v2 鼠源cDNA 为模板, 扩增出鼠源VH-CDR3 库, 随后将鼠源VH-CDR3 库移植到人源scFv (VH3-VΚ1) 上并通过核糖体展示富集抗VSTM 1-v2 人源化 scFv 文库, 该文库序列通过与原核基因表达调控等成分 (N 端添加 T7 启动子、SD 序列和PelB 序列、C 端添加his 标签序列和T7 terminal 序列) 拼接, 构建表达 TA 载体转化大肠杆菌 BL21 (DE3) 进行可溶性表达。最终构建了一个库容达 1012 的人源化单链抗体文库, 完成了1 000 个克隆的初步鉴定, 并筛选出EC50 达2 1.35 nmol ·L 1 的抗VSTM 1-v2 人源化 scFv 。该研究结果, 一方面获得了具有潜在应用价值的抗-VSTM 1-v2 先导抗体; 另一方面, 为快速获得人源化抗体提供了一个新技术途径。关键词: VSTM1-v2 细胞因子; 鼠源VH-CDR3; 改良的TA 克隆; 人源化单链抗体中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 13) 11-1651-06 Gene construction and screening of humanized single chain antibody library against VSTM1-v2 cytokine 1 2 2 2* FU Xiao-jin , ZHANG Yong-xia , DAI Yun-j ian , WANG Ming-rong (1. Sichuan Industrial Institute of Antibiotics, Chengdu 610052, China; 2. Chengdu Institute of Biological Products Co., L td., Chengdu 610023, China ) Abstract : To rapidly select potent anti-VSTM1-v2 scFv (single-chain antibody fragment) by construction and screening