基于rna干扰技术的外排转运体体外模型及其评价.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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基于rna干扰技术的外排转运体体外模型及其评价.pdf

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1122 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 15, 50 (9): 1122 1127 基于RNA 干扰技术的外排转运体体外模型及评价 * * 孔令雷, 阳海鹰, 原梅, 庄笑梅 , 李桦 (北京毒物药物研究所, 抗毒药和毒理学国家重点实验室, 北京 100850) 摘要: 为建立多药耐药相关蛋白2 (MRP2) 和P-糖蛋白 (P-gp) 的体外RNA 干扰模型, 应用化学合成的siRNA 转染HepG2 细胞, 并用实时PCR 和Western blot 检测mRNA 和蛋白的表达变化, 应用MRP2 和P-gp 底物罗丹明和甲氨蝶呤进行功能评价确定模型是否成功。siRNA 筛选结果显示, MRP2 siRNA-3 或P-gp siRNA-2 能够显著地抑制MRP2 或P-gp 的mRNA 表达, 抑制率分别为68% 和84%; MRP2 siRNA-3 或P-gp siRNA-2 (80 nmol ·L 1) 作用48 h 能够明显地抑制MRP2 或P-gp 的蛋白表达, 抑制率分别为62% 和70%, 同时不影响其他转运蛋白的表达; 给予MRP2 或P-gp 底物甲氨蝶呤或罗丹明孵育, 发现MRP2 siRNA-3 或P-gp siRNA-2 (80 nmol ·L 1) 作用48 h 能够显著增加甲氨蝶呤或罗丹明的细胞内浓度, 表明其外排受到抑制。以上结果表明利用化学合成的 siRNA 能够显著地抑制细胞MRP2 和P-gp 的表达和功能, 提示细胞干扰模型建立成功。关键词: RNA 干扰; 小干扰RNA; P-糖蛋白; 多药耐药相关蛋白2 中图分类号: R963 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 15) 09- 1122-06 The evaluation of efflux transporter model based on RNA interference technology in vitro * * KONG Ling-lei, YANG Hai-ying, YUAN Mei, ZHUANG Xiao-mei , LI Hua (State Key Laboratory of Toxicology and Medical Countermeasures, Beiji ng Institute of Pharmacology and Toxicology, Beijing 100850, China ) Abstract : In the present study, the specifically knockdown models of P-gp or MRP2 were