第六章荧光分光光度法重点分析.pptVIP

第六章 荧光分光光度法 基本要求： 了解荧光光谱法的基本原理和应用特点。 了解荧光分光光度计的组成以及特点。 掌握荧光光谱法的定量分析方法。 了解影响荧光强度的因素。 第一节 概论 荧光粉(俗称夜光粉)，通常分为光致储能夜光粉和带有放射性的夜光粉两类。 一、应用： 1.定量分析 能产生荧光 或能形成荧光配合物的物质。 2.简单定性 回答“是不是”。 第二节 基本原理 一、分子荧光的产生 物质吸收光辐射 价电子从基态跃到激发态，然后再回到基态 释放能量 ⒈以热能的形式。⒉以光辐射的形式。 以光辐射形式释放能量时，发射荧光。这种现象称为光致发光。 最常见的光致发光：荧光和磷光。 两者发光机理不同，寿命不同。荧光寿命10-9～10-6秒，磷光寿命10-3～10秒。 荧光可由激发态的分子产生，也可由激发态的原子产生，本章介绍分子荧光。 由于荧光的产生由价电子引起，所以，荧光光谱属于电子光谱，其波长范围位于：紫外光区和可见光区。 二、激发光谱和发射光谱 ⒈ 激发光谱 固定荧光波长，以激发光波长对荧光强度(F)所作的光谱曲线。 ⒉ 发射(荧光)光谱 固定激发光波长，以荧光波长对荧光强度F所作的光谱曲线。 三、分子荧光与分子结构的关系 分子要产生荧光，首先要能吸收紫外光或可见光。 四、荧光强度与浓度的关系 Φ：量子效率，发射光量子与吸收光量子之比。 I0：入射光强度 ε：摩尔吸光系数 b： 光程 c：浓度 第三节 荧光分光光度计 一、基本结构示意图 二、主要部件及功能 1．光源 高压汞蒸气灯，氙灯。 能提供紫外光和可见光，光强度比紫外-可见光分光光度计光源大得多。 2．激发光单色器 作用：提供单波长的激发光。 色散元件：棱镜或光栅。 出射狭缝宽度可调 。 3．样品池 须用石英材料制成。 4．荧光单色器 将样品池中的散射光、反射光、杂质荧光等滤掉，只让荧光通过。 出射狭缝宽度可调。 5．检测器 光电转换元件，测定荧光的强度。 检测方向与激发光方向垂直：在垂直方向上没有透过光的干扰。 由于荧光的强度较弱，一般以光电倍增管作检测器。 第四节 定量分析 一、定量方法 一般采用工作直线法。作C—F直线。 数据处理 先预扫描，可以发现这些面巾纸中所含荧光物质一样，都为波长370的荧光物质，然后用370的光来照射，产生荧光，根据拉伯比尔定律，物质荧光物质的强度应该与浓度成线性关系。然后得到一系列的强度： 下表是所测荧光物质的含量排名情况 二、影响荧光强度测定的因素 1．激发光照射 有一些荧光物质若受到强光照射，会发生分解而导致F↓。 所以，荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸，在 测定时才打开光闸让激发光照射样品池。 2．温度 温度↑，荧光效率下降，F↓。（因为，温度↑，增加分子间 碰撞机会而使能量消耗掉。） 4．溶剂 有些溶剂会使荧光效率下降，也可能带来干扰荧光。 三、定量分析的特点及应用 灵敏度高。可高达ppb级（10-9），甚至ppt级（10-12）。 选择性好，与能产生荧光的物质少有关。 思考题 一、概念 （荧光）激发光谱 （荧光）发射光谱 原子发射光谱是在原子化过程中自然发射的谱线 而原子荧光光谱是用另一波长的谱线去激发原子发出与自然发射不同的另一波长的谱线 二、问答题 试述分子荧光产生的过程。 试述分子荧光强度与浓度的关系式，并说明公式成立的前提条件及原因。 分别说明荧光分光光度计两个单色器的作用，以及将光路设计成直角方向的原因。 为什么可见光分光光度计的光路是直线方向，而荧光分光光度计的光路是直角方向？ * * 回顾： 四大类 电化学分析法 光学分析法 色谱分析法 其它分析方法 原子光谱法 分子光谱法 X射线光谱法 核磁波谱法 紫外-可见光分光光度法 荧光分光光度法 红外吸收光谱法 拉曼光谱法 “荧光粉主要有增白作用，在纸张、包装袋、洗衣粉、塑料、纺织品等上常有应用，这也难怪塑料袋上检出荧光粉。” 荧光粉的种类很多，现在市场上常见的就有500多个品种，性状各异，我们常用的Ａ4打印纸上就有荧光粉。 二、特点： 灵敏度高，比吸收光谱法高103~104倍。ppb 选择性比吸收光谱法好。 荧光 磷光 无辐射跃迁 激发态 亚稳态（三重态） 基态 分子的去活化过程： 当处于基态单重态（S0）的分子吸收波长为λ1和λ2的辐射后,分别被激发到第一激发单重态