第三章高效液相色谱1.ppt

Waters?600E型HPLC操作规程 一.冲洗流路 1.开脱气机电源,开泵控制器电源。 2.按“Setup”功能键,设定压力范围。 3.按“Direct”,键,设定流速和溶剂组成。 4.开清洗阀,从多通阀抽出残余的溶剂。 5.降流速,关清洗阀,升流速,平衡色谱系统 二.系统配置 1.开检测器电源。开微机电源。 2.双击Millennium图标,进入软件。 3.双击Configure?system图标,击Acquisition、0K。击Acquisition?severs的“+”号,击仪器系统名。 4.击File菜单,选Exit。 5.双击Browse?Project图标,选合适的项目名、0K。 6.击QuickSet工具。 三.设置仪器方法 1.击Instrument?Method中的Edit按钮。 2.在Instruments树下,击600泵,输入压力上下限,再输入流速和溶剂比例。 3.在Instruments树下,击2487检测器,设置起止波长 4.选Fi1e、Save?as,输入仪器方法名,击Save按钮。 5.选File、Exit。? 6.在QuickSet的仪器方法下的下拉菜单中选一个仪器方法 7.击Monitor,观察基线情况。 四.运行色谱 1.击Run工具,准确抽取标样或样品。 2.将进样针插入进样孔,将进样阀柄向上扳到Load位置 3.注入溶液,再将阀柄向下扳到Iniect位置,拔出进样针。 五.色谱数据处理 1.一次运行结束后,在Project的Channel中击待处理样品名 2.击Review工具,在3D下切取某波长的色谱。 3.击处理方法向导。 4.设置峰宽、临界值、积分区间、最小峰面积(或峰高) 5.输入组分名称和浓度。 6.击积分工具。 7.选File、Save、Resuit。 六.打印色谱报告 1.在Proiect中选Results标签,再选其中的样品名。 2.击预览工具,显示Repodhblisher。 3.击Cancel按钮,选File、New。 4.选Individual、Next,再选Individual、Finish。 5.选Prcject图标,将所选的样品拖入报告中。 6.击预览工具,显示待打印的报告。 7.击打印工具,再打印机上输出报告 HPLC的环境设置： HPLC的日常操作条件：温度：10-30℃；相对湿度80％； 最好是恒温、恒湿，远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施。 HPLC用水可以通过以下几个方面来得到： 1 专门的纯水机或超纯水机； 2 去离子水重蒸； 3 二次或三次重蒸水； 4 采用类似家用的纯水机； 5 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水； 6 其它途径； 不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质越高放置时间越短。 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气等。 HPLC六通阀进样器的保养 进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0.45μm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。 为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。 泵的保养： 使用流动相尽量要清洁； 进液处的砂芯过滤头要经常清洗； 流动相交换时要防止沉淀； 避免泵内堵塞或有气泡； 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染； 柱的保养： 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭 RP18、C18、ODS与BDS有什么区别？[讨论]C18是在硅烷基上接了直链的十八烷基配体，通常称为ODS，是最常见的色谱柱。ODS其后所标的1，2，3，4，5有的是指含碳的不同，有的是不同代的替换产品，其中,ODS-1是指未经封尾处理的,ODS-2是经封尾处理的，其性能的差异要看厂家的研究报告，不同厂家的ODS差异很大。普通ODS分析酸性、中性或弱碱性化合物时均可以获得较佳的峰不对称度。但当分析药物化合物中的强碱极性样品时，样品峰形就极差，拖尾严重，定量分析精度下降，造成这样现象的原因是在合成固定相时尚有残余的硅羟基。BDS是一种特殊的ODS柱（碱灭活），末端经修饰，其残余硅羟基大大降低，分析碱性化合物，可获得满意的峰形。但现在新型的ODS柱，多采用末端封尾技术，