超高效液相色谱串联质谱法同时测定马尾藻中4种内源性植物激素.docVIP

超高效液相色谱串联质谱法同时测定马尾藻中4种内源性植物激素 　　摘 要 建立了利用超高效液相串联质谱法（UPLC-MS/MS）同时测定马尾藻中4种植物激素（吲哚乙酸、吲哚丁酸、脱落酸、玉米素）的方法。马尾藻样品经过70%甲醇提取后，经PCX+PAX固相小柱净化，使用反相C18色谱柱分离。以5 mmol/L乙酸铵（含0.01%甲酸）和甲醇作为流动相进行梯度洗脱，采用多反应离子监测模式（MRM）分析测定。在0.01～1.0 μg/mL内，各种植物激素的相关系数均大于0.9990。4种植物激素的回收率为84.3%～102.1%，相对标准偏差为1.1%～6.4%。本方法的检出限为0.025～0.2 μg/kg。 中国论文网 /8/view-7206862.htm 　　关键词 马尾藻； 双柱联用； 超高效液相色谱串联质谱； 内源性植物激素 　　1 引 言 　　海藻是海洋资源的重要组成部分，是一种低等隐花植物，有绿藻、褐藻、红藻、蓝藻等10门。研究发现，海藻中含有许多活性物质，可以开发成海洋医药、保健、化妆用品等[1]。马尾藻是一类褐藻（Phaeophyta），作为海藻中的大型经济海藻，其种类超过250种，广泛分布于暖水和温暖的海域。我国的广东和广西沿海盛产马尾藻，约有60种[2]。大量研究发现，海藻中的促生长物质对陆生植物具有显著的促生长作用[3]，已有一些基于海藻植物生长调节剂的商业产品出现[4]。我国作为农业大国，随着海藻生长调节剂的商业化进程，对于马尾藻植物激素的检测方法的开发显得十分的必要。 　　海藻植物激素是一类十分重要的内源植物激素，含有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、脱落酸（ABA）及玉米素（ZT）等植物激素[5，6]。目前，对于海藻中植物激素的研究报道很少，并且国内未建立相关标准，多组分植物生长调节剂检测方法的国家标准也尚未建立。因此选择合适的检测方法对于海藻植物激素的检测显得更加重要。目前，关于植物激素的检测方法主要有三大类，分别是生物测试、免疫检测和仪器分析方法。其中， 仪器分析方法具有高灵敏度和高选择性的优势，特别是液相色谱-串联质谱法，是近年来生物化学中常用的检测技术[7～9]。 　　目前，还未见双柱联用净化方法用于马尾藻植物激素检测的报道，关于固相萃取文献中的方法大多数只能检测同一类性质的植物激素[10]。钟冬莲等[11]采用HPLC-MS/MS法成功测定了毛竹笋4种典型的内源性植物激素。本研究采用固相萃取双柱联用净化的方法，可以同时检测多组分不同性质的植物激素，大大缩短了检测时间。此外本研究采用超高效液相色谱串联质谱法对海藻中的4种植物激素同时进行分析检测，并探究了检测条件、前处理技术和方法学。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　Acquity超高效液相色谱仪（二极管列阵检测器，美国Waters公司）； Extrapid柱-盘手动固相萃取仪（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）； QTrap5500线性离子阱串联质谱仪（美国AB Sciex公司）； Milli-Q超纯水仪（美国Millipore公司）； 循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）； Neofuge 15R高速冷冻离心机（上海力申科学仪器有限公司）； KQ-300E超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； BAS124S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）； R-215旋转蒸发器（德国BUCHI公司）； 津腾溶剂过滤器（天津市津腾实验设备有限公司）； IKA-Tisbasi组织匀浆机（德国IKA公司）； 固相小柱PAX和PCX（月旭材料科技（上海）有限公司）。 　　标准品：吲哚乙酸、吲哚丁酸、玉米素、脱落酸 （美国Sigma公司）； 甲醇（色谱纯，美国Spectrum公司）； 甲酸（色谱纯，天津光复精细化工研究所）； 乙酸铵（分析纯，国药集团化学试剂股份有限公司）； 2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT 生工生物工程（上海）股份有限公司）； 氨水（分析纯，西陇化工股份有限公司）； 水为Milli-Q超纯水； 缓冲溶液（含0.1%甲酸、0.5 mmol/L乙酸铵， pH 3.1）。 　　2.2 标准溶液的制备 　　标准溶液配制：分别准确称取10 mg（精确到0.01 mg）的IAA， IBA， ABA和ZT标准品，用100% 甲醇定容到100 mL，配制100 μg/mL的标准贮备液，密封， 于 20℃储存。分别吸取上述标准贮备液1 mL 于10 mL容量瓶中，用液相体系（60%缓冲溶液和40%甲醇， V/V）定容，配制成10 μg/mL的混合标准溶液，并进一步稀释成一系列的标准溶液，待测。 　　2.3 样品制备 　　2.3.1 样品前处理 马尾藻四月下旬采集于东山岛，洁净海水漂洗多次，用吸水纸将表面吸干