高速逆流色谱溶剂体系筛选方详解.pptVIP

溶剂体系的筛选方法　 　 1. 分配系数（ K ）法 K ＝ Cs/Cm Cs为溶质在固定相中的质量浓度 Cm为溶质在流动相中的质量浓度 Cs和Cm的比值可通过HPLC测得 理想的分配比值 k = 0.5~2，允许0.2~5 3. 分析型HSCCC法 优点： 分析时间短 溶剂消耗少 进样量小，节省样品 确定的体系可直接用于 放大制备，重现性佳 仪器：TBE-20A 转速：1600r/min 流速：0.5ml/min样品：8％沙棘提取物体系：正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水 洗脱方式：下相作为流动相 HSCCC工艺重现性 4.多元溶剂体系的选择方法 Ito方法 HBAW方法 ARIZONA方法 Ito认为溶剂体系的筛选可以从氯仿-甲醇-水(2:1:1)开始，如果分配系数落在0.2-5的范围内，通过调整可以获得满意的分配系数。如果样品主要分布在非水相的下相中时，应尝试下表中箭头向上的体系，如果样品主要分布在上相时，则应试验相反方向的体系。 BHAW方法是将非极性溶剂体系正已烷-乙腈（1:1）和极性溶剂体系正丁醇-水（1:1）结合起来，形成了7种多元溶剂体系，编号为-3～+3 首先试验0号溶剂体系，以确定下一步试验的方向。如果样品倾向于极性的水相，应该进一步实验0～+3号正方向的体系，否则应该试验0～-3号反方向的体系 这组溶剂的特点是紫外透明性很好 ARIZONA方法是结合乙酸乙酯-水体系（1：1，体系A，极性）和正庚烷-甲醇体系（1：1，体系Z，非极性）定义了23种整个溶剂范围内的溶剂体系，并用A～Z的23个字母（E，I，O除外）表示 操作时只需做两个实验，将样品分别溶解在体系A和体系Z中，如果绝大部分样品集中在体系A的乙酸乙酯相和体系Z的甲醇相，那就有可能在体系A～Z中找到一个合适的体系 总结： 溶剂体系的选择是HSCCC分离中最关键也是难度最大的一个环节，一般从样品的溶解度，通过参考文献及常用体系, 测定K值等来筛选溶剂体系，然后再通过上述提到的各种方法进行调整。 随着逆流色谱技术的普及，越来越多的人致力于体系筛选的研究工作。 * 高速逆流色谱溶剂体系筛选方法 　　　　　　 晋晓峰 研发部副主管 　　　　　　　　　　　上海同田生物技术有限公司 HSCCC分离条件 基本原则: 不造成样品分解或变性 对样品有较大溶解度 固定相在分离柱中有较好保留 样品在两相溶剂系统中有合适的分配系数 Cs Cm 两种溶质分离因子： α ＝ K1/K2（1.5） 当Cs / Cm ＜＜0.5时，出峰时间太快，分离度较差 当Cs / Cm ＞＞2时，出峰时间太长，且峰形变宽 芦荟提取物的HPLC图谱 实例（HPLC法测K值） 芦荟未知物 芦荟苷B 芦荟苷A － 上层 － 下层 体系 氯仿/异丁醇/甲醇/水（4/0.25/3/2） 目标物质 芦荟未知物 芦荟苷A 芦荟苷B 分配系数K 0.9 1.9 2.3 HSCCC保留时间 2.3 h 4.0 h 5.3 h 芦荟未知物 芦荟苷B 芦荟苷A 芦荟提取物的HSCCC图谱 芦荟苷B 芦荟苷A 芦荟未知物 对已知化合物类别的物质可参考相关文献，在文献提供的体系的基础上进行调整 对未知样品，可采用氯仿-甲醇-水=10-3-7或正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水=1-1-1-1两个极性分布范围较广的体系先进行尝试，也可以根据样品的极性选择相对应的溶剂体系，再根据目标组分的分配系数进行调整 　 2. 经验法 　 溶剂体系根据极性可以分为三类： 疏水性（石油醚体系，正已烷体系） 中等疏水性（氯仿体系，甲基叔丁基醚体系） 亲水性（正丁醇体系，乙酸乙酯体系） 　 实例（分析型HSCCC法） 1：1：1.2：0.8 1：1.2：1.2：0.8 0.8：1.2：1.2：1.2 0.8：1.2：1.2：1.5 正己烷/乙酸乙酯/乙醇/水（0.8：1.2：1.2：1.7） 槲皮素 　 山萘酚 　 异鼠李素 　 TBE-20A 分析型HSCCC TBE-300B 半制备型HSCCC TBE-1000A 制备型HSCCC 地址：上海市张江高科技园区爱迪生路326号 邮编：201203 TEL: 021 Fax: 021 Cell phone:E-mail: tauto@ How to Con