蛇苔过氧化物酶Cys127-gly突变体与酵母表达载体的构建 毕业论文.doc

绵阳师范学院 本科生毕业论文（设计） 题 目 蛇苔过氧化物酶Cys127-gly突变体与酵母表达载体的构建 专 业 生 物 技 术 院 部 生命科学与技术学院 学 号 0811420347 姓 名 指 导 教 师 答 辩 时 间 2012年5月 蛇苔过氧化物酶Cys127-gly突 变体与酵母表达载体的构建 摘 要：本研究以过氧化物酶基因为原材料，构建其突变体，使氨基酸序列中的色氨酸转换为甘氨酸，酶蛋白中失去二硫键。然后利用设计好的引物扩增突变体序列以及质粒DNA，利用双酶切法产生粘性末端，使突变体DNA与质粒DNA连接产生重组体。再利用电穿孔转化法将重组质粒转入酵母细胞中进行表达。并挑选阳性菌株进行PCR和双酶切鉴定。 该试验通过过氧化物酶突变体的构建与表达，获得了含甘氨酸的过氧化物酶蛋白，为过氧化物酶的进一步研究奠定了基础。 关键词：突变体；表达载体；PCR ；琼脂糖凝胶电泳；双酶切 Snake moss peroxidase Cys127-gly mutants and the construction of yeast expression vector Undergraduate: Qiu Yongxiu Supervisor:Bian Chunxiang Abstract：In this study, Construct mutant by using peroxidase gene as raw material，making the tryptophan become to glycine in the conversion of amino acid sequence。Enzyme protein lost its disulfide。Then use the designed primers to amplify mutant sequences，as well as plasmid DNA, Use the double enzyme method to produce sticky end。Then connect the mutant DNA and plasmid DNA to produce recombinant。Then use Electroporation conversion method to Transplant recombinant plasmid into yeast cells to express。And the select out the positive strains，using them to do the PCR and double restriction enzyme identification. The test by constructing and expressing the peroxidase mutant ，Obtaining the protein containing glycine peroxidase，laying the foundation for further study of peroxidase Key words: mutant； expression vector； PCR； Agarose Gel Electrophoresis ；Double Digests [ 目 录 1前言………………………………………………………………………………….1 1.1蛇苔过氧化物酶的研究现状……………………………………………………..1 1.1.1蛇苔的研究现状………………………………………………………………...1 1.1.2过氧化物酶的研究现状……………………………………………………….1 1.2突变体的研究现状………………………………………………………………..2 1.3表达载体的研究现状……………………………………………………………..2 1.4实验目的………………………………………………………………………….3 1.5实验意义………………………………………