浆片细胞程序性死亡的二氧化碳机理-powerpoint文档.pptVIP

* * 学生：刘伟元（M05307） 导师：金银根 教授 　　在我国，杂交水稻的年种植面积约1600万公顷，占水稻种植面积的50%、全球水稻种植面积的10%以上。然而杂交亲本间的花时、花期不遇、柱头外露少、杂种结实率低、开花张角小、花开不闭合或不完全闭合和杂种率低、籽粒畸形且产量低等均与浆片的行为异常直接有关。 选题依据 研究内容 实验材料与方法 可行性分析 研究计划及预期成果 选 题 依 据 我们已知在一些禾本科植物的开花过程中，浆片的形态结构和生理生化变化的大致特征，也知道CO2能够促进和调节水稻等作物的开花。 可是我们并不清楚水稻等作物开花过程中，浆片活动和凋亡过程的本质，CO2与浆片细胞的凋亡过程的效用本质，什么因素影响和作用于浆片细胞的活动和凋亡，通过什么途径或方法才能有效调节和控制禾本科作物的开花等。 1.1浆片的解剖结构 浆片由表皮、基本组织薄壁细胞和辐射状分布的维管束构成。浆片表皮层细胞外壁厚、有角质层、没有气孔（器）。可育系浆片的基本组织薄壁细胞含丰富的原生质、细胞器（线粒体、质体）和贮藏物质，如淀粉粒等；可育系浆片维管束数目多，其筛管、导管也多。 1.2浆片在开花过程中的生理生化特征 在开花过程中，浆片细胞的呼吸强度增强，有明显的CO2释放峰，淀粉等物质水解、可溶性糖含量增加，细胞水势下降，体积与鲜干重明显上升。在闭花过程中，浆片细胞的K+、Ca2+浓度提高；细胞核发生形变，核质凝缩；质体、线粒体内膜及内溶物相应解体甚至空胞化等。 王忠等人研究指出：野败型不育系水稻开闭颖慢由于是浆片中维管束发育不良、缺乏导管、颖花呼吸弱、细胞自溶缓慢；还发现一定浓度的CO2气体或含碳有机酸处理稻、麦穗对开花有着显著的促进作用。 1.3浆片与开花的分子生物学研究 目前，对于禾本科植物花器官发育与开花特性的研究已涉及基因水平。Kang等“根据模式植物控制花器官发育的基因同源序列来筛选、分离水稻的cDNA文库，获取相关基因，然后根据转基因植物花器官的表现型特征推断该基因的功能”的方法，筛选并克隆了与水稻颖花发育有关的基因，如位于3号染色体上的 OsMADS1和 OsH1基因等，并认为它们可能与颖花或浆片等的发育有关；Jang等认为花器官调节基因OsFOR1与水稻小穗原基和浆片、雄蕊等的分化有关，而OsMADS3的表达则能使浆片发育成雄蕊。 研 究 内 容 ①浆片PCD过程中“多膜体”的成因分析 ②浆片PCD过程中的Ca2+ 时空特征观察 ③浆片凋亡过程中的生理生化分析 ④浆片对CO2和含碳有机酸的响应机制研究 材 料 与 方 法 3.1 材料的选择与种植 育性正常的水稻闭颖不开颖突变体（HDAR002、Clo1）、开颖不闭颖突变体（SRS）;生产中广为应用的杂种F1（籼优63）及其亲本组合（珍籼97A和明恢63）或两系F1（两优培九） 及其亲本组合（培矮64S和扬 稻6号）等水稻品种（系）为 材料。采取盆栽和大田分期 播种的方法进行。 取样 前固定 后固定 脱水 置换 包埋 半薄切片 TBO染色 光镜观察 超薄切片 双重染色 电镜观察 3.2 实验方法 a.浆片PCD过程的透射电镜观察 1.花前3日，质体中含有淀粉粒， 导管中内含物未完全撤离，6500 2.花前1日，质体中淀粉粒已消失， 薄壁细胞液胞中已有许多溶质，8000 3.临开颖时，薄壁细胞液胞 中仍有许多溶质（*处） 6500 4.开颖时，薄壁细胞液胞中的溶质 浓度变低，细胞器开始解体 6500 5.闭颖时，液胞膜破裂和解体， 细胞壁开始折叠 6500 6.闭颖后1日，薄壁细胞已自溶 和收缩（*处），维管束细胞中 有许多大的亲锇颗粒，导管中 内容物增多 6500 7.闭颖后1日小穗轴与浆片连接处 组织横切面，导管内充满浆片细胞 的分解物而呈黑色 6500 8.开颖时浆片中导管， 中空，不见内含物 8000 9.闭颖后1日浆片中导管， 大多数导管充满内含物 5000 b. PCD不同阶段细胞器和离子的动态特征 用激光共聚焦显微镜借助于ACAS 激光共焦系统，通过低光探测、定量测定浆片细胞的细胞核、线粒体、质体、溶酶体等的分布动态； 选用Indo-1、BCECF 、Fluo-3或CNARF等荧光探针以定量检测细胞内K+、Ca2+、Mg2+等分布的动力学特征； 结合SFP软件，对浆片亚细胞结构 的空间关系进行三维图像重组，分析浆 片PCD不同阶段的细胞超微结构、离子 区域化动态特征。 L.激光发射装置 S.样品 P.荧光检测装置 .光通过分束器 取样 低温研磨 冰冻离心 制胶 装槽 加缓冲液 加粗酶液 加溴酚兰 低温电泳 漂洗