第8章植物的细胞培养及次生物质生产课件.docx

第八章?植物的细胞培养及次生物质生产  植物细胞培养（plant?cell?culture）：是 指在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞 团进行培养使其增殖的技术。  分类： 根据培养规模:小规模培养和大批量培养； 根据培养方式:悬浮培养、单细胞培养等； 根据要求获得产物:用于诱变的细胞培养和生 产次生代谢产物的细胞培养。 内容： ? §1.单细胞分离 ? §2.悬浮培养 ? §3.单细胞培养技术 ? §4.植物细胞大规模培养与次生产物生产 §1.单细胞分离 由完整的植物器官分离单细胞。 由培养组织中分离单细胞。 1、由完整的植物器官分离单细胞 叶片是分离单细胞的最好材料 机械法 酶解法 1-1、?机械法 第一种方法：用刀片刮叶片 撕去下表皮 露出叶肉细胞  用解剖刀刮下细胞  第二种方法：叶片研碎、离心  加研磨介质 研碎成粉 过滤、离心  原因：只有薄壁组织排列松散，细胞 间结触点很少，用机械法分离叶肉细 胞才能取得成功。 1-2、?酶解法 Takebe等（1968）最早报道：用果胶酶处 理可以分离大量的叶肉细胞。  加果胶酶  过滤、离心  2、由培养组织分离单细胞 茎段  步骤：  (1)?诱导产生愈伤组织；  (2)?愈伤组织反复继代，  使组织不断增殖，提高愈  伤组织的松散性；  15ml?medium/1g  继代 悬浮 摇床用于振荡  120rpm?culture????? transfer (3)（Suspension  1time/3d culture)将愈伤组织 在液体培养基中培  100-130目网过滤  3?weeks  养，建立悬浮培养  物 Centrifuge(离心）?isolation  注意： 1、选择适宜的外植体：幼胚、胚轴、 子叶是最常使用的外植体。 2、选择适宜的培养基：较高浓度激 素浓度，特别是生长素，必要的附加物 质，例如水解酪蛋白、Pro、Gln。 3、继代多次，以获得均匀一致疏松 的愈伤组织。 §2.细胞悬浮培养(cell?suspension?culture)  一、细胞悬浮培养的概念和意义 悬浮培养是将单个游离细胞或小细胞团悬浮 在液体培养基中进行培养增殖的技术。  Bioreactor?for?continuous cell?suspensions  Shaker?for?suspension?culture  Culture?wheel  意义： 1、细胞可以不断增殖，形成高密度的细 胞群体，适于大规模培养；  2、能够提供大量较为均匀的细胞，为研 究细胞的生长、分化创造方法和条件。  二、细胞悬浮培养的应用 Cell?suspension Plants Artificial?seeds  Isolation?protoplasts Mutation?select  Secondary?products  影响悬浮细胞生长的因素：  ? 起始愈伤组织的质量：松散性好、增殖快、再生能 力强。其外观一般是色泽呈鲜艳的乳白或淡黄色，呈 细小颗粒状，疏松易碎。 ? 接种细胞密度：接种初期的细胞密度过低往往使延 迟期加长，悬浮细胞的起始密度一般在0.5～ 2.5×105个细胞/毫升，低于这一密度则会使细胞生 长延迟。 ? 培养条件：方式、温度、继代周期  §3.植物细胞大规模培养与次生代谢产物生产  一.?概述 二.?培养系统 三.?植物细胞规模培养技术要点 四.?提高细胞次生代谢产物的途径  Introduction   ? ? Primary?metabolites?are?compounds?needed?in?the?basic processes?that?keep?the?plant?alive,?such?as carbohydrates,?proteins?and?lipids. Secondary?metabolites?are?compounds?produced?in plants?that?are?not?necessary?for?the?plants?basic functions.?Some?secondary?metabolites?are?produced?as chemical?defense?against?microbes?and?animals.  1. Type: Secondary?metabolites?are?used?in?the pharmaceutical（制药）?industry,?as flavourants（香料）?and?dyes,?and?in