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* 样品与分离是提高低丰度蛋白和膜蛋白检出限的有效方法。 * 为完成聚焦良好的第一向等电聚焦，蛋白必须完全溶解和解聚。无论样品是相对的粗提物还是经过沉淀步骤，样品裂解液必须包含一定的组分以确保在进行第一向等点聚焦之前的完全溶解和变性。基本成分包括： 尿素是一种中性离液剂，通常在裂解液中的浓度为8mol/L。尿素可溶解和解折叠大多数的蛋白质，形成完全随机的构象，使所有的离子集团暴露于溶液中。近年，硫脲的加入可以进一步提高溶解度，特别是膜蛋白。 在裂解液中均包含非离子去污剂和兼性离子去污剂，以确保蛋白完全溶解和防止通过疏水相互作用导致蛋白聚合。常用的非离子去污剂有 NP-40、Triton-X100，兼性离子去污剂包括4%CHAPS，如果上述溶解发生困难，还可以考虑用SDS，不过由于它是一种阴性离子去污剂，所以须于其他的去污剂合用，并且终浓度应低于0.25%。 * 这些图像分析软件的基本功能都是相近的，都包含一下几个步骤：蛋白质点检测（spot detection)、背景消减 （background substraction)、归一化处理 (normalization)和蛋白点匹配 （spot matching) * 它以蛋白质检测目的物,蛋白质是基因表达的最终产物,因而它比基因芯片更进一步的接近生命活动的物质层面, 由于蛋白质芯片的探针蛋白特异性高、亲和力强,所以对生物样品的要求较低,故可简化样品的前处理,甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组织等)进行检测 同时,由于疾病的发生、发展与某些蛋白质的变化有关,所以利用蛋白质芯片还可直接筛选出与靶蛋白作用的化合物,从而大大推进药物的开发. 此外,蛋白质芯片有助于了解药物或毒物与其效应相关蛋白质的相互作用,从而促进药物学和毒理学研究的发展. 蛋白质芯片能同时检测生物样品中与某种疾病或环境因子损伤可能相关的全部蛋白质含量的变化情况即表型指纹,对监测疾病的进程和预后及判断治疗效果有重要意义. * 很多生长因子如EGF、PDGF、FGF等激活受体酪氨酸激酶后，通过中介分子可活化由原癌基因FaS编码的Ras蛋白，后者能进一步催化其底物蛋白的酪氨酸磷酸化反应，并引发蛋白磷酸化的级联反应，最终导致细胞的增殖效应。由于Ras蛋白为多种生长因子信号转导过程所共有，故把此信号转导途径称为Ras通路。 Ras通路有下列成员所构成：生长因子受体(受体酪氨酸蛋白激酶)一含有SH2结构域的接头蛋白(如Grb2)一鸟嘌呤核苷酸释放因子(如SOS)一Ras蛋白一MAPKKK(如Raf)一MAPKK—MAPK一转录因子一DNA合成。当EGF受体被激活后，由于自身的酪氨酸发生磷酸化，细胞质中的Grb2—SOS复合物便与受体结合，从而把SOS带到细胞膜，对Ras蛋白的鸟嘌呤核苷酸结合状态发挥作用。Ras蛋白结合于细胞膜的内侧面，在非激活状态F，Ras蛋白与GDP结合呈失活状态，SOS蛋白则能促进Ras—GDP释放GDP，并使Ras与GTP结合而转变为Ras—GTP的活化状态，进而激活信号转导途径的下游蛋白。 Ras通过催化其效应底物来调节一系列与细胞生长、分化、凋亡有关的重要功能 郑州大学生物工程系 郑州大学生物工程系 * 样品与分离是提高低丰度蛋白和膜蛋白检出限的有效方法。 * 为完成聚焦良好的第一向等电聚焦，蛋白必须完全溶解和解聚。无论样品是相对的粗提物还是经过沉淀步骤，样品裂解液必须包含一定的组分以确保在进行第一向等点聚焦之前的完全溶解和变性。基本成分包括： 尿素是一种中性离液剂，通常在裂解液中的浓度为8mol/L。尿素可溶解和解折叠大多数的蛋白质，形成完全随机的构象，使所有的离子集团暴露于溶液中。近年，硫脲的加入可以进一步提高溶解度，特别是膜蛋白。 在裂解液中均包含非离子去污剂和兼性离子去污剂，以确保蛋白完全溶解和防止通过疏水相互作用导致蛋白聚合。常用的非离子去污剂有 NP-40、Triton-X100，兼性离子去污剂包括4%CHAPS，如果上述溶解发生困难，还可以考虑用SDS，不过由于它是一种阴性离子去污剂，所以须于其他的去污剂合用，并且终浓度应低于0.25%。 * 这些图像分析软件的基本功能都是相近的，都包含一下几个步骤：蛋白质点检测（spot detection)、背景消减 （background substraction)、归一化处理 (normalization)和蛋白点匹配 （spot matching) * 它以蛋白质检测目的物,蛋白质是基因表达的最终产物,因而它比基因芯片更进一步的接近生命活动的物质层面, 由于蛋白质芯片的探针蛋白特异性高、亲和力强,所以对生物样品的要求较低,故可简化样品的前处理,甚至可直接利用生物材料(血样、尿样、细胞及组织等)进行检测 同时,由于疾病的