艾滋病样品采集、处理要点.ppt

艾滋病样本采集、处理与运输石嘴山市疾控中心艾滋病初筛中心实验室 HIV检测 HIV抗体检测 ELISA 快速HIV检测 免疫印记法 （ Western Blot） 其他方法：免疫荧光法（IFA）、放射免疫沉淀实验 HIV核酸定性检测 HIV RNA定量测定（病毒载量测定） CD4+和CD8+T淋巴细胞检测 HIV抗原检测 （p24） 样品的采集 艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用样品的采集方法如下： （一）血清样品采集：用一次性注射器（或真空采血管）抽出一定量静脉血，一般为5mL，放入一次性塑料试管，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固和血块收缩后再用3000rpm离心15分钟，吸出血清备用。 （二）抗凝血样品采集： 用加有抗凝剂的真空采血管或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。因为肝素是Taq酶的强抑制剂，会使核酸检测出现假阴性结果。如需进行病毒RNA测定，采集的抗凝血应在4-8小时以内分离血浆。 （三）采样注意事项 1、采集样品应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。 2、采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层乳胶手套。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。 3、进行静脉抽血时，一定要保证足够的光线，而且采血人员应背靠墙壁，后面不能有人员走动。以防抽血时碰撞，造成意外刺伤。 4、不要把用过的锐利器具（针头）传递给别人； 5、对用过的针头不要用手去重新盖上针套；不要用手从一次性注射器上移去针头；不要用手弯曲、折断或处置用过的针头； 6、用过的注射器及针头直接放到可防止锐利器物刺穿的专门容器中，统一进行高温消毒，115℃，30分钟，然后深埋处理； 7、其它废弃物（酒精棉球、手套）要在作高温焚烧处理； 8、不要将锐利废弃物（针头）同其它废弃物（酒精棉球）混在一起； 9、不要将锐利废弃物放在儿童可以接触到的地方； 10、用肥皂和水认真洗手； 11、采样人员要带乳胶手套、穿隔离衣，避免直接接触体液； 12、处理废弃物的人必须戴厚质乳胶手套； 样品的运送 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 应采用WHO提出的三级包装系统： 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 样品的运送 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。 三层包装的优点： 减少包装受损和泄漏的可能性 减少可能造成传染的暴露 提高运输效率 样品的运送 血清和血浆样品应在2?8℃条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18?23℃运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。 运送感染性材料必须有记录。 如分离血浆仍有困难，可直接将抗凝血-20℃以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。 样品的运送 特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。 注意事项 送检标本应使用真实姓名和地址，不采用匿名制。 标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。 抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。 标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5天内完成测试。 样品的接收 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。 样品的接收 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果