抗体综述分析.ppt

第一节 抗体的概念与分类 抗体（antibody，Ab) 抗体与免疫球蛋白是不同的概念 抗体是免疫球蛋白，但免疫球蛋白不全是抗体。 血清蛋白根据电泳可分为： 白蛋白，α,β,γ球蛋白， 抗体分布在 α,β,γ球蛋白的区域， 但主要分布在γ球蛋白区域。 抗体是与抗原对应的名称 着重于特异性生物活性，不着重于化学本质。 免疫球蛋白是指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白 并不明确对具体抗原的特异性，着重于化学含义。 抗体的分类 （一）根据所对应的抗原分： （一）根据所对应的抗原分： 抗体的分类 （一）根据所对应的抗原分： 抗体的分类 （一）根据所对应的抗原分： 抗体的分类 （一）根据所对应的抗原分： （二）根据有无抗原刺激分： （二）根据有无抗原刺激分： 抗体的分类 （二）根据有无抗原刺激分： （三）根据与抗原反应的性质分： 抗体的分类 （三）根据与抗原反应的性质分： 抗体的分类 （三）根据与抗原反应的性质分： （四）根据抗原性分： 第二节 免疫球蛋白的结构 Porter等对血清IgG抗体的研究证明： 一、单体 轻链与重链是由二硫键连接形成一个四肽链分子称为Ig分子的单体； 二、单体结构 所有Ig的单体都是四条肽链的对称结构, 即: 两条糖基化重链(H)和两条非糖基化轻链(L); 每条重链和轻链分为氨基端(N端)和羧基端(C端)。 （一）轻链和重链 1．轻链（light chain，L） 大约214个氨基酸残基； 分子量约24kD ； 通常不含碳水化合物； 每条轻链含有两个由链内二硫键所组成的环肽。 L链共有 两型： kappa(κ)与lambda(λ)， 同一个天然Ig分子上L链的型总是相同的。 正常人血清中的κ∶λ约为2∶1。 2．重链（heavy chain，H链） 约为轻链的2倍，含450～550个氨基酸残基； 分子量约为55或75kD； 每条H链含有4～5个链内二硫键所组成的环肽。 4）根据H链抗原性的差异可将其分为5类： 不同H链与L链（κ或λ链）组成完整Ig的分子分别称为IgM、IgG、IgA、IgD和IgE （二）可变区和恒定区 通过对H链或L链的氨基酸序列比较分析，发现其N-末端序列变化很大，称此区为可变区（V），而C-末端氨基酸则相对稳定，变化很小，称此区为恒定区（C区） 。 1、可变区（variable region, V区） 位于L链靠近N端的1/2(约含108～111个氨基酸残基)和H链靠近N端的1/5或1/4 (约含118个氨基酸残基)。 L链和H链的V区分别称为VL和VH。 在VL和VH中某些局部区域的氨基酸组成和排列顺序具有更高的变化程度，这些区域称为高变区（hypervariable region, HVR）。 2、恒定区（constant region, C区） 位于L链靠近C端的1/2（约含105个氨基酸残基)和H链靠近C端的3/4或4/5区域(约从119位氨基酸至C末端)。 （三）功能区 Ig分子的H链与L链可通过链内二硫键折叠成若干球形功能区，每一功能区约由110个氨基酸组成。 在功能区中氨基酸序列具有高度同源性。 1、L链功能区分为两区 2. H链功能区 IgG、IgA和IgD的H链有 4个功能区： 1个可变区(VH) 3个恒定区(CH1、CH2和CH3) IgM和IgE的H链有 5个功能区 1个可变区(VH) 4个恒定区 (CH1、CH2、CH3和CH4) 3、功能区的作用 VH和VL是结合抗原的部位； CH和CL上具有部分同种异型的遗传标志； （四）铰链区 hinge region 铰链区不是一个独立的功能区，位于CH1与CH2之间； 包括H链间二硫键，该区富含脯氨酸，不形成α-螺旋； 当抗体与抗原结合时，铰链区发生扭曲，使抗体分子的2个抗原结合点更好地与2个抗原决定簇发生互补。由于CH2和CH3构型变化,显示出活化补体、结合组织细胞等生物学活性. 分泌型IgA和IgM产生示意图 五、免疫球蛋白的酶水解片段 1. 木瓜蛋白酶的水解片段 Porter等最早用木瓜蛋白酶(papain)水解兔IgG，从而获知了Ig四肽链的基本结构和功能。 裂解部位：IgG铰链区H链链间二硫键近N端侧切断。 裂解片段：共裂解为3个片段： 每个Fab段由1条完整的L链和1条约为1/2的H链组成 分子量为54kD。 Fab段可结合抗原，但表现为单价,不能形成凝集或沉淀反应. Fab中约1/2 H链部分称为Fd段，约含225个氨基酸残基， 包括VH、CH1和部分铰链区。 2. 胃蛋白酶的水解片段 Nisonoff等最早用胃蛋白酶(pepsin)裂解免疫球蛋白; 裂解部位：铰链区H链链间二硫键近C端切断。 裂解片段： F(ab’)2： 包括VH、VH1和铰