蛋白质分子量测定分析.pptVIP

习惯上把每分钟4,000转（r/min,g）的离心机称为低速离心机;每分钟20,000 （r/min,g）转的离心机称为高速离心机,这类离心机有冷冻装置。每分钟20,000 （r/min,g）转以上的离心机称为超速离心机. 密度梯度离心 * 柱直径——样品量 柱长——分离效果 * 操作压——流速 50 柱长 75 柱直径 * 保存：膨胀、半收缩、干燥。 * 常用的标准凝胶是指浓度为7.5%的凝胶，大多数生物体内的蛋白质在此凝胶中电泳，能获得满意的结果。 * 为了在使用凝胶做实验时有较高的重现性，制备凝胶所用的Acr浓度，Bis和Acr的比例、催化剂的浓度、聚合反应的溶液pH值、聚胶所需时间等能影响泳动率的因子都必须保持恒定。 * 快离子很快移动到最前面，原来它停留在那部分地区则形成了低离子浓度区，即低电导区。低电导区有较高的电位梯度，就引起了电位梯度的突变。这种高电位梯度又使蛋白质阴离子和甘氨酸阴离子在此区域加速前进，追赶快离子。当快离子和慢离子的移动速度相等的稳定状态建立以后，快离子和慢离子之间造成一个不断向正极移动的界面。夹在快、慢离子间的样品蛋白质阴离子的移动界面就在这个追赶中逐渐被压缩，聚集成一条狭窄的区带。浓缩效应可使蛋白质浓缩数百倍。 * 凝胶的pH值明显增加,并导致甘氨酸的大量解离,有效泳动率增加.甘氨酸的分子量远小于蛋白质,它将赶上并超过各种蛋白质分