第二章糖和苷.分析.pptVIP

2. 酶催化水解 酶促反应具有专属性高，条件温和的特点。 麦芽糖酶（maltase）专使α-葡萄糖苷键水解。杏仁苷酶（emulsin）是一种β-葡萄糖苷水解酶。 用酶水解苷键可以获知苷键的构型，可以保持苷元结构不变，还可以保留部分苷键得到次级苷或低聚糖，以便获知苷元和糖、糖和糖之间的连接方式。 第四节 苷键的裂解（糖链的降解） 4. 过碘酸裂解反应(Smith裂解法） 苷元结构容易改变的苷以及C-苷的水解特别适宜。但不适于苷元上也有1，2-二元醇结构的苷类。 第四节 苷键的裂解（糖链的降解） C-苷的水解：比原苷元多一个醛。 第四节 苷键的裂解（糖链的降解） 5. 糖醛酸苷的选择性水解反应 糖醛酸的苷键是很难用稀酸水解的，需要采用一些特殊的选择性水解反应，如紫外光照射法、四醋酸铅分解法、醋酐-吡啶法等。 第四节 苷键的裂解（糖链的降解） 第五节 糖的核磁共振性质 一般1H-NMR谱中，糖端基质子信号在δ4.3-5.5，其余部分在3.2-4.2左右，因此可以从端基质子数了解糖的种类和个数。 第五节 糖的核磁共振性质 C1-H和C2-H的偶合常数，决定端基碳的构型。 ?-D-葡萄糖 ?- D-葡萄糖 六碳吡喃糖苷，当是葡萄糖或半乳糖，β-构型其J1，2为8 Hz左右，而α-构型双面角近60°，J1，2为4 Hz左右。 第五节 糖的核磁共振性质 ?-D-甘露糖 ?- D-甘露糖 而甘露糖和鼠李糖难于区分端基碳的构型。 第五节 糖的核磁共振性质 JC，H也可对六碳吡喃糖苷的竖键（即β-型）和横键（α-型）的鉴定有很大帮助，前者为160-165Hz，后者为170-175Hz。 13C-NMR：anomeric 碳：98-110，β型在低场 C2~ C4碳：70-85 C5 、C6碳：60-65 CH3（甲基五碳糖）：18 第五节 糖的核磁共振性质 苷化位移（glycosidation shift） 糖的端基羟基成苷后，端基碳（C1）和苷元的α-C的化学位移均向低场移动，而相邻的碳（β-C）稍向高场移动，偶尔也有稍向低场移动的，这种苷化前后的位移变化，称做苷化位移。 第五节 糖的核磁共振性质 ☆苷化位移规律： 醇苷：端基及α-C向低场 苷元为链状，苷化位移随伯、仲、叔递减。 苷元为环醇，若β-C有烷基取代，苷化位移与苷元α位及糖的端基手性有关: 苷元α位及糖的端基手性相同，与β-C无取代相似。 苷元α位及糖的端基手性不同， 苷化位移比β-C无取代大。 第五节 糖的核磁共振性质 ☆苷化位移规律： 酚苷： 与醇苷相反， α-C向高场， β-C向低场。 酯苷： 与醇苷相反， α-C向高场， β-C向低场。 第五节 糖的核磁共振性质 第六节 糖链结构的测定 三个问题： 单糖组成 糖的连接顺序和位置 苷键构型 （一）纯度鉴定 常用的纯度鉴定法有：官能团分析；比旋度；毛细管气相层析；HPLC等。 电泳是常用的鉴定纯度方法。 第六节 糖链结构的测定 多糖的分子量只是一种统计平均值。 （二）分子量的测定 单糖、低聚糖及其苷的分子量测定目前大多用质谱法。 在不同型号的Sephadex或Sepharose柱层析上测定多糖分子量是用量小、操作简便的方法。 工作中需要一系列结构相似的已知分子量的多糖作标准曲线。 第六节 糖链结构的测定 （三）单糖的鉴定 1、糖的种类 一般是将苷键全水解，水解产物鉴定。 ①色谱法：PC；TLC；GC（衍生物）；HPLC ②NMR：化学位移；J值 ③化学法：如Molish反应 2、糖的数目的确定 主要根据NMR：碳谱 90~110；氢谱 4~6 2D-NMR；MS等。 第六节 糖链结构的测定 （四）单糖之间连接位置的决定 将糖链全甲基化，然后水解苷键，鉴定所获得的甲基化单糖，其中游离-OH的部位就是连结位置。 目前常使用 13C-NMR 方法，主要是通过归属各碳信号，以确定产生苷化位移的碳。 第六节 糖链结构的测定 （五）糖链连接顺序的决定 早期是缓和水解法。将糖链水解成较小的片断（各种低聚糖）再分析。 质谱分析也以用于低聚糖的结构研究。 自旋晶格弛豫时间T1是结构研究中常用的另外一个参数。一般说外侧糖比内侧糖的T1 值大。 第六节 糖链结构的测定 观察两糖之间质子的远程偶合确定。 第六节 糖链结构的测定 （六）苷键构型的确定 核磁共振技术 酶催化水解 分子旋光差法（Klyne法） Klyne将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷元的糖的一对甲苷的分