组织工程学-诸论.ppt

组织工程学提出的背景 组织工程学提出的背景 组织移植目前主要的治疗方法： 组织工程学的定义 种子细胞 成体干细胞 干细胞 ——是一种能够在不断增殖的同时保持自我更新能力，而且能产生至少一种分化后代的未分化细胞。 干细胞主要指胚胎干细胞＆成体干细胞。 胚胎干细胞——来自发育早期着床前胚胎中未分化的细胞 胚胎干细胞作为种子细胞有其独特的两大优点： 成体干细胞 组织细胞 已经分化成熟，其分化潜能受限，体外可塑性有限，且存在来源有限，容易老化，难以大量扩增以及取材对机体造成创伤等问题，临床应用可能性不大。 细胞外基质（extracellular matrix) ——由胶原、弹性蛋白、层粘连蛋白等蛋白质和透明质酸、肝素、硫酸肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素和硫酸角质素等糖胺聚糖（GAG）构成的化学与物理交联网络。 糖胺聚糖一般荷负电。 细胞支架材料的性能要求 需有良好的生物相容性（组织工程研究中重点强调组织相容性(tissue compatibility），尤其是细胞相容性 （cytocompatibility)）。 具有生物可降解性、可塑性、孔隙率、机械强度 足够的表面积容纳细胞及促进细胞生长 生物相容性：宿主反应 组织工程支架材料的植入可引起宿主的反应，即生物相容性问题； 组织工程支架材料引起的宿主反应主要是通过宿主细胞对材料表面的识别引起的；而生物材料的本体性能则对生物相容性基本没有问题； 如何调控生物材料的表面性能以期达到最佳的宿主反应或细胞-材料相互作用，降低不利的宿主反应是组织工程支架材料研究的关键问题。 材料与细胞的相互作用 在大多数情况下，细胞与生物材料表面之间的相互作用并不是直接完成的； 当生物材料与生理环境相接触时，首先到达生物材料表面的是水分子和无机盐离子，其次是体液、血液或培养基中的蛋白质分子，最后才是细胞到达材料表面； 材料与细胞的相互作用 材料与细胞的相互作用 细胞在生物材料表面的粘附机制 细胞在材料表面的粘附可分为两个阶段：细胞首先通过伪足的延伸与材料表面接触，进而通过粘着斑粘附到材料表面； 两个阶段都包括细胞对细胞外基质中蛋白配体的识别； 细胞粘连的物理基础是通过特异性与非特异性的相互作用来完成的。特异性的作用即受体-配体间的作用；非特异性的作用主要通过静电力、范德华力和空间结构的匹配等。温度、介质浓度、离子浓度和pH等也影响细胞的粘附。 细胞相容性的影响因素 表面粗糙度：粗糙的表面有利于细胞的粘附； 表面微孔结构：表面微孔结构对细胞粘附与增长的影响，随微孔尺寸不同而有所不同（比细胞小的孔、与细胞尺寸相似的孔、超过细胞尺寸的孔）； 纤维状材料的表面曲率大小对细胞的取向生长行为也有一定的影响，细胞因能识别小尺寸纤维的表面曲率而被激活，产生明显的排列取向，一般认为细胞能识别的纤维直径上限为20um。 细胞相容性的影响因素 一般，具有适度亲疏水性表面最有利于细胞的粘附和铺展，而亲水性太强或疏水性太强的表面均不利于细胞的粘附和铺展； 对上述现象的解释，因为生物材料表面的亲疏水性对其表面所吸附的蛋白的数量和构象有关； 亲水性很强的表面不利于蛋白质的吸附，故不利于细胞的粘附； 疏水性很强的表面，一是非粘附蛋白（如白蛋白）在材料表面的吸附阻碍了粘附蛋白的吸附，另外，吸附在高度疏水材料表面的粘附蛋白，其分子链的天然构象遭到破坏，致使蛋白质分子链中与细胞膜表面整合素相结合的活性位点（RGD）无法完全暴露，不利于细胞的粘附。 细胞相容性的影响因素 材料的表面能对细胞相容性有重要影响； 一般认为，较高的表面能有利于细胞的粘附、铺展和增殖； 低表面能材料与活体组织之间大部分处于分离状态，表面粘附的细胞呈现球形或近球形，粘附作用极弱；而高表面能材料的表面则可被活体细胞完全覆盖，并呈现出扁平、拉长的形态，粘附作用很强。 细胞相容性的影响因素 在生理pH下，细胞表面带有分布不均匀的负电荷。 因此，通常带有正电荷的材料表面与带负电荷的细胞之间的静电吸引将有利于细胞的粘附。 细胞相容性的影响因素 某些官能团如羟基、氨基、羧基、羰基、酰胺基、磺酸基等可通过调节表面的亲水性和表面电荷而促进细胞的粘附和生长；而砜基、硫醚、醚键等对细胞生长影响不大，刚性结构如芳香醚类则不利于细胞的粘附。 将生物活性因子固定在材料表面是提高材料细胞相容性的最有效手段之一。 细胞相容性的影响因素 微图案化表面是指采用各种表面微构建技术如光刻、等离子体刻蚀、离子束刻蚀、微接触印刷、分子自组装等技术制备的具有微米级或亚微米级图案的表面； 微图案化表面的图案既可以是物理图案，也可以是化学图案，都对细胞生长有重要影响。 通过控制微图案化表面中不同区域化学性质可以实现细胞在某些区域的选择性粘附、增殖和定向迁移； 微图案化表面不仅用来控制细胞的选择性粘附和增殖，还被用来控制