基因工程课作业分析.ppt

基因工程 ——药物成果及在生物柴油原料中的应用 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。 基因工程药物是先确定对某种疾病有预防和治疗作用的蛋白质，然后将控制该蛋白质合成过程的基因取出来，经过一系列基因操作，最后将该基因放入可以大量生产的受体细胞中去，这些受体细胞包括细菌、酵母菌、动物或动物细胞、植物或植物细胞，在受体细胞不断繁殖过程中，大规模生产具有预防和治疗这些疾病的蛋白质，即基因疫苗或药物。 以下介绍几种基因工程药物： 基因工程胰岛素 基因工程干扰素 乙肝疫苗 人白细胞介素-2 促红细胞生成素 人造血液 基因工程胰岛素 胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成。外源性胰岛素主要用来糖尿病治疗。 过去，胰岛素主要从猪等大家畜胰腺中提取。从一头猪的胰腺中只能提取出 300单位胰岛素，而一个病 人每天就需要40单位胰岛素， 因此远远不能满足需要。 基因工程的出现有效地解 决了这个问题。 胰岛素是第一个基因工程药物。 运用基因工程，首先要找到胰岛素基因，在人的胰岛细胞里有一段特定结构的DNA分子指挥着胰岛素的合成，然后又找到在人的大肠里存在对人体无害的大肠杆菌。把人的胰岛素基因转入到大肠杆菌的细胞中，随着大肠杆菌的繁殖，胰岛素基因也一代代的遗传下去。大肠杆菌繁殖速度相当快，大约20分钟就能繁殖一代，把它放到大型的发酵罐里进行人工培养，就可以大量繁殖，并且生产出大量人的胰岛素。大肠杆菌成了生产胰岛素的“活工厂”，胰岛素供不应求的问题彻底解决了。 基因工程干扰素 干扰素（IFN）是一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制乙肝病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。干扰素是一组具有多种功能的活性蛋白质（主要是糖蛋白），是一种由单核细胞和淋巴细胞产生的细胞因子。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。 基因工程生产干扰素过程 1.设计合成干扰素基因的两端引物（完全的），每条引物内或 5-端最好有内切酶酶切位点。 2. 有药物诱导细胞，如佛波酯，使细胞表达干扰素升高。 3. 破碎细胞，提取细胞总mRNA。 4. 用逆转录试剂盒逆转录，把总mRNA逆转录成cDNA。 5. 以cDNA为模板、干扰素引物为引物，PCR，得到完全的干 扰素基因的PCR产物。 6. 提取载体（质粒、病毒等），双酶切，再把干扰素基因的PCR产物用相应的酶酶切，用连接酶连接。 7.连接完成后分离纯化，测序，与原干扰素序列比对。 8.鉴定序列无误后（无义突变也行），导入受体细胞，筛选。 9.筛选出来后，提取重组产生的干扰素，活性测定。 10.有活性再扩大规模培养，提取生产 。 乙肝疫苗 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到预防乙肝感染的目的。 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）是一种乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它采用现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位。这种乙肝表面抗原亚单位具有原料易得、产量大、安全、高效等特点。 人白细胞介素-2 人白细胞介素-2(IL_2)是人体免疫网络中起调节作用的一种重要细胞因子,它为活性蛋白,具有免疫增强、抗肿瘤和抗感染的生物活性,能够治疗恶性肿瘤、肝炎、结核和免疫缺陷病,是一个很有潜力和前景的医疗药品。 用基因工程技术构建的工程菌发酵生产,1L工程菌可得100mg以上的产品。 促红细胞生成素 人体中的促红细胞生成素是由肾脏和肝脏分泌的一种激素样物质，能够促进红细胞生成。服用红细胞生成素可以使患肾病贫血的病人增加血流比溶度（即增加血液中红细胞百分比）。 用基因工程可以快速生产出所需的促红细胞生成素。 人造血液 人造血液是利用基因工程技术制造而成，它是模拟人体骨髓的造血过程，从脐带细胞中制造出大量血红细胞。一条脐带最终可以转换为大约20个单位的可