糖尿病基因诊断要点.pptVIP

步骤： 1、PCR扩增靶DNA。 2、PCR产物的快速变性而后快速复性，形成特定空间结构的DNA单链分子。 3、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。 4、PAGE胶的银染。 基因芯片（gene chip） 指通过微阵(Microarray)技术将高密度DNA片段通过高速点样机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如硅片、膜、玻璃片等固相表面，以同位素或荧光标记的DNA待测样品，借助碱基互补杂交原理，进行大量的基因表达及监测等方面研究的技术。 “探针”：载玻片或尼龙膜表面的寡核苷酸 “样品”：标记了荧光或同位素待测靶核酸 —— DNA、cDNA或RNA 近日从武汉大学中南医院了解到, 该院周新教授率领的课题组新近发明的糖尿病基因诊断芯片, 可以通过基因检测在一天之内确诊线粒体型糖尿病。 将成千上万个我们克隆到的特异性靶基因固定在一块芯片上，对来源于不同个体、不同组织、不同细胞周期、不同发育阶段、不同分化阶段、不同病变、不同刺激（包括不同诱导、不同治疗手段）下细胞内的mRNA或逆转录所得的cDNA进行检测，从而对这些基因表达的个体特异性组织特异性发育阶段特异性分化阶段特异性。进行综合评定与判断，极大加快这些基因功能的确立。 基因芯片工作流程 病例 唐同学，男，15岁。三个月前受凉感冒，之后常感觉口渴、总想喝水、感觉没有力气，体重减轻5斤。以为是感冒还没完全好，没有在意，口渴时就喝可乐等甜饮。两天前明显感觉没力气，并出现恶心、呕吐、上腹不适。 到医院查空腹血糖22.7mmol/L；尿常规：葡萄糖4+，酮体3+，蛋白-。血常规：WBC13.6*109/L；肝功、肾功、血脂、尿酸、血尿淀粉酶正常；血气分析：PH值 7.05；尿微量白蛋白正常；心电图：窦性心动过速；肝胆脾双肾B超：脂肪肝。 体检：血压90/60mmHg，身高169cm，体重48kg，皮肤粘膜较干燥，双肺呼吸音稍粗，心率110次/分，律齐，心界无扩大，心音正常，各瓣膜听诊区未闻及杂音，双下肢无水肿。 诊断：1型糖尿病，糖尿病酮症酸中毒。 治疗：立即给与小剂量胰岛素持续静滴，补液，及其他对症支持治疗，患者血糖逐渐降至正常，恶心呕吐消失，精神明显好转，尿酮体转阴后改为胰岛素皮下注射。查胰岛素释放显示：0’-2.1 uIU/ml，30’-13.5 uIU/ml，60’-17.8 uIU/ml，120’-17.5 uIU/ml，180’-11.8uIU/ml。继续胰岛素治疗，监测血糖，调整胰岛素用量。 一.糖尿病的临床表现 二.辅助检查 三.糖尿病的基因诊断 一.糖尿病的临床表现: 典型者有“三多一少”症状，即多饮、多尿、多食、消瘦，不少患者缺乏典型临床症状，表现为反应性低血糖，或某些急慢性并发症的症状。 有多尿，多食症状者 有原因不明的体重下降，特别是原来超重或肥胖者 肥胖或者超重者 有糖尿病家族史，年龄大于40岁者 皮肤瘙痒，反复出现疖肿或者皮肤溃疡经久不愈者 有一过性高血糖史或尿糖阳性史者 有反应性低血糖发作史者 视力下降者 有巨大儿（出生体重=4kg）分娩史的女性或男性阳痿 二.辅助检查 血糖的测定 口服葡萄糖耐量试验 （OGTT） 空腹血浆或血清胰岛素及C肽测定 胰岛素或C肽释放试验 糖基化血红蛋白测定 糖化血清蛋白测定 自身抗体测定 其他检查 1999年WHO修改糖尿病标准如下： 空腹血糖(FPG)的分类： ＜6．0mmol／L为正常； ≥6．0～＜7．0mmol／L为空腹血糖过高(未达糖尿病，简称IFG)； ≥7．0mmol／L为糖尿病(需另一天再次证实)。 空腹血糖的定义是至少8小时没有热量的摄入。 可疑糖尿病，空腹及餐后血糖增高但未达到糖尿病诊断标准者应行此试验。成人采用75g葡萄糖负荷，儿童1．75g/kg，正常人血糖高峰出现于服糖后1/2～1h，峰值不超过8．9～10mmol/L(160～180mg/dl)。 采用放射免疫法测定的胰岛素包括胰岛素原及与抗体结合的胰岛素。C肽测定不受胰岛素抗体影响，不与胰岛素产生交叉免疫反应，也不受外源性胰岛素干扰。1型糖尿病空腹血浆胰岛素和C肽水平很低，2型糖尿病则多为正常或增高。 本试验的方法与OGTT相同，只是于空腹，服糖后30，60，120，180min时采血同时测胰岛素或C肽，以直接了解胰岛β细胞的功能状态。正常人血胰岛素和C肽的高峰与血糖高峰一致，于服糖后30～60分钟胰岛素测值为空腹的5～10倍，C肽测值为空腹的5～6倍。1型糖尿病患者糖负荷后无胰岛素和C肽释放反应峰，其释放曲线呈低平状态；2型糖尿病肥胖患者，糖负荷后胰岛素和C肽释放反应峰值正常或增高，但高峰却在2h后延迟出现；病程已久消瘦2型糖尿病患者胰岛素和C肽的释放反应峰值低于正常。 糖基化血红蛋白