开展个体化医疗的基因检测.doc

移植实验室与外科实验室联合开展个体化治疗相关的基因检测 目前，个体化治是医学发展的主要方向之一。移植免疫实验室和外科实验室结合自身技术特点可开展肿瘤EGFR基因突变、Cyp3A5和HLA-B1502的基因多态性检测。EGFR是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，已检测到了至少29种不同的突变。19外显子中的缺失和L858R突变是NSCLC患者对酪氨酸激酶抑制剂(TKI)敏感的最主要突变位置。而T790M突变与耐药有关。Cyp3A5的多态性决定了免疫抑制剂他克莫司（Tacroliums, FK505）的药物代谢过程，分快代谢和慢代谢基因型，显著影响患者外周血药浓度。而卡马西平引起的重症药疹与HLA-B1502有关，我院亦有发现此类患者的基因型。经过1年半的工作和各相关科室的帮助，实验室已经开展200多例EGFR突变检测、60多例CYP3A5的检测和少量HLA-B1502的检测。 DNA测序技术和ARMS技术均能用于这些检测。特别是ARMS利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，达到对基因突变检测的高特异性和高灵敏度，可检测出样品中含量低至0.1-1.0%的突变基因。 测序图和PCR图示例 （对不同类型突变进行一个示例，并且一种类型的示例来自一个标本） 19外显子缺失 测序图： Exon-19 正向测序 从箭头位置开始缺失，结合正反向测序图可以判断出突变类型为2235_2249del15 Exon-19 反向测序 从箭头位置开始缺失，结合正反向测序图可以判断出突变类型为2235_2249del15 PCR图： 19-Del mu：阳性； L858R mu：阴性； T790M mu：阴性 L858R突变： 测序图： Exon-21 正向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 Exon-21 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 PCR图： 19-Del mu：阴性； L858R mu：阳性； T790M mu：阴性 L858R+T790M+双突变： 测序图： Exon-20 正向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为T790M。 Exon-20 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为T790M。 Exon-21 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 Exon-21 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 PCR图： 19-Del mu：阴性； L858R mu：阳性； T790M mu：阳性 L858R+T790M+双突变： 测序图： Exon-20 正向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为T790M。 Exon-20 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为T790M。 Exon-21 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 Exon-21 反向测序 箭头出现双峰，表明该位置是突变，突变类型为L858R。 PCR图： 19-Del mu：阴性； L858R mu：阳性； T790M mu：阳性 统计结果： 单突变 19DEL+ L858R+ T790M+ 合计 Positive 43 58 0 101/209 Negative 166 151 209 108/209 P% 0.205741627 0.277511962 0 N% 0.794258373 0.722488038 1 双突变 19DEL+ L858R+ L858R+ T790M 合计 Positive 4 1 5/209 Negative 205 208 209 P% 0.018779343 0.004761905 N% 0.999910155 0.999977216