第三章蛋白质化学概述.ppt

第三章 蛋白质化学 早在1878年，思格斯就在《反杜林论》中指出：“生命是蛋白体的存在方式，这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。” 由于大多数蛋白质的含氮量接近于16%，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量： 蛋白质水解 除甘氨酸外，氨基酸均含有一个手性?-碳原子，因此都具有旋光性。比旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基酸的重要依据 构成蛋白质的20种氨基酸都不吸收可见光。酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)具有共轭双键结构，能够吸收紫外光。 氨基酸在结晶形态或在水溶液中，以两性离子的形式存在。在不同的pH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。 茚三酮反应 氨基酸与茚三酮（ninhydrin）的反应是一个检测和定量氨基酸和蛋白质的重要反应。 Sanger反应 2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene, DNFB）也叫做Sanger试剂。DNFB在弱碱性溶液中与氨基酸发生取代反应，生成黄色化合物二硝基苯基氨基酸（dinitro phenyl amino acid, DNP氨基酸） Edman反应 苯异硫氰酸酯（PITC）在弱碱性条件下，与氨基酸反应生成苯乙内酰硫脲衍生物，即PTH-氨基酸，此反应又称之Edman反应，该反应是蛋白质或多肽氨基酸序列测定常用的反应。 一个氨基酸的氨基与另一个氨基酸的羧基之间失水形成的酰胺键称为肽键(peptide bond)。 氨基酸通过肽键连接起来的化合物称为肽(peptide)。 肽键中的C-N键具有部分双键性质，不能自由旋转。已知C—N单键的键长为0.147nm，C=N双键的键长是0.127nm，而肽键中C—N的键长为0.132nm 肽键具有平面性，组成肽键的4个原子和2个Cα处在同一平面内，称酰氨平面(amide plane) 。 多肽链可以看成由Cα串联起来的无数个酰胺平面组成。 指蛋白质分子中氨基酸的排列顺序及二硫键的位置。 每一种蛋白质都具有唯一的氨基酸序列，实际上蛋白质的氨基酸序列是由DNA决定的。 蛋白质的氨基酸序列具有重要意义：1. 蛋白质的氨基酸序列是阐明蛋白质生物活性的分子基础； 2. 蛋白质的一级结构决定它的空间结构；3. 氨基酸序列的改变可以导致蛋白功能异常和疾病(图）；4. 通过对一些蛋白质的氨基酸序列的比较可以反应出一些生物亲缘关系(图） 。 构象（conformation）取代基团当单键旋转时形成不同的立体结构，这种空间位置的改变不涉及共价键的断裂。 例如乙烷分子中C—C单键旋转时，它们所连接的氢原子相对空间位置随之改变，产生无数种构象，其中交叉型构象最稳定，重叠型构象最不稳定 指多肽链主链由于氢键的作用而形成的空间排布。它只涉及肽链主链的构象及链内或链间形成的氢键。 主要有?-螺旋、?-折叠、?-转角、γ-转角、无规则卷曲等。 (1) ?-螺旋 (? -helix) 1. 多肽链主链环绕螺旋中心轴螺旋式上升。螺旋一周，沿轴上升的距离即螺距为0.54nm，含3.6个氨基酸残基；两个氨基酸之间的距离为0.15nm。 ?-折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿桩折叠构象。 ?-折叠有两种类型：平行式和反平行式。 由四个氨基酸残基组成，弯曲处的第一个氨基酸残基的 -C=O 和第四个残基的 –N-H 之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。 是指在二级结构基础上，肽链进一步折叠卷曲形成的特定空间构象。包括侧链基团在内的所有原子空间排列。 维系蛋白质三级结构的主要作用力是次级键。包括氢键、疏水力、离子键、范德华力、配位键、酯键等。另外还可有二硫键。 指寡聚蛋白中各亚基立体排布和各亚基间的相互作用。 由两条或两条以上的多肽链盘绕聚合而成的蛋白质，称为寡聚蛋白质，其每一条具有三维结构的多肽链称为亚基(subunit)。 维持亚基之间的化学键主要是疏水力。 蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。 大部分蛋白质均含有带芳香环的Tyr、Trp和Phe。因此有紫外吸收特性。 这三种氨基酸的在280nm 附近有最大吸收（图）。因此，大多数蛋白质在280nm 附近显示强的吸收。 利用这个性质，可以对蛋白质进行定性鉴定。蛋白质浓度＝1.55A280-0.76A260 Tertiary structure of sperm whale myoglobin. a) backbo