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实验结果
HPLC检测条件:流动相为乙腈:注射用水=60:40;检测波长为227nm;流速u=1.2ml/min;进样体积为20ul;柱温T=45℃。
精确称量紫杉醇3mg置于50ml容量瓶中,分别溶解于经注射用水稀释的20%乙腈,35%乙腈,50%乙腈及100%乙腈。浓度见表1
表1 紫杉醇药物质量和浓度
紫杉醇
批号溶剂药物重量
(mg)体积(ml)药物浓度
(mg/ml)TF20%乙腈3.05500.0610TP99-1202043.07500.0614TF35%乙腈3.04500.0608TP99-1202043.04500.0608TF50%乙腈3.07500.0614TP99-1202043.03500.0606TF100%乙腈3.03500.0606TP99-1202043.07500.0614
3.出峰时间比较
表2 HPLC检测的出峰时间
紫杉醇
批号出峰时间20%乙腈35%乙腈50%乙腈100%乙腈 TF6.026.025.975.916.006.015.975.916.016.005.975.91TF平均值6.016.015.975.91 TP99-1202046.016.005.975.906.045.995.975.906.045.995.965.90TP99-120204 平均值6.035.995.975.90 通过4组实验比较,两种批号的紫杉醇平均出峰时间相差无几,只有经20%乙腈溶解的紫杉醇TP99-120204出峰时间在TF后,50%时平均出峰时间相等,35%和100%时出峰时间TP99-120204 早于TF
反相色谱中固定相为弱极性或非极性,而流动相为极性,固定相与极性物质结合能力较弱,所以极性大的物质先出峰。而脂溶性大,极性小的物质出峰时间比较靠后。
峰面积比较
两种紫杉醇在不同浓度有机溶剂下的出峰面积大小
随着有机溶剂浓度的增加,紫杉醇的峰面积也变大。脂溶性越大的物质其极性越小,越不易溶于水,所以HPLC检测时的出峰面积越小。
当有机溶剂为20%乙腈时,紫杉醇没有完全溶解,紫杉醇TP99-120204的峰面积小于TFJ120204的峰面积。
表4 紫杉醇乙腈溶液HPLC检测结果
检测 日期样品编号进样次数出峰时间峰高峰面积理论塔板报告编号
2013.11.12
20%乙腈 TF0.0610mg/ml
16.02101161550734341bc02926.0098161548574456bc042 36.01103411530884605bc044Mean6.0110091154339
TP99-120204 0.0614mg/ml
16.0185661327134459bc04326.0487401309174436bc03336.0490941353444509bc034Mean6.038800132991
35%乙腈
TF0.0608mg/ml
16.0215834224110584407bc03626.0115688223866814394bc03736.0015588024019874385bc038Mean6.011570352399909
TP99-120204 0.0608mg/ml
16.0014674422809874307bc03925.9914887322977554370bc04035.9914841923003734298bc041Mean5.991480122293038
50%乙腈
TF0.0614mg/ml
15.9715098922255244326bc04525.9715192021909854778bc04635.9715025921964424623bc047Mean5.9715105622043
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