1.1、1.5h第四章蛋白质工程概述课件.pptVIP

概 述 自 我 介 绍 曲 萌 北华大学分子生物学教研室（419） 医学博士在读 电话：6605155 邮箱：dzhqmdzh@ 基因组学——蛋白质组学 基因工程——蛋白质工程 问题：1.基因组与蛋白质组有什么联系？ 2.蛋白质工程与基因工程的区别 ？ 基因组与蛋白质组有什么联系？ 遗传信息从DNA到mRNA，然后合成各种结构蛋白质和功能蛋白质，构成有机体，完成生命的功能。 基因是遗传信息的源头，而蛋白质是基因功能的体现者和执行者。 HGP完成了基因序列的确定，但它不能提供认识各种生命活动的直接分子基础，所以必须研究生命活动的执行者——蛋白质。蛋白质组学的研究宗旨就是解决这个问题。 蛋白质组的研究是对基因组研究的重要补充，也是后基因组时代研究基因功能的最重要途径。 蛋白质组学研究的特点 研究对象的整体性 研究目标的动态性 体现生命的复杂性 研究对象的整体性 当前蛋白质组学的主要任务是： 传统上，我们只是对某一发育阶段或特定位置上的单个基因进行研究，缺乏对蛋白质全面、整体的认识，而蛋白质组学是把基因组所表达的全部蛋白质作为研究对象，在建立和发展蛋白质组研究技术方法的同时，进行蛋白质组分析。 分析工作主要有两个方面： 一方面—建立正常生理条件下机体、组织、细胞的全部蛋白质的图谱和数据库，获得蛋白质组群的整体信息，为进一步的分析工作提供基础； 另一方面—比较分析非生理条件下蛋白质组所发生的变化。 研究目标的动态性 组成有机体的所有不同细胞都共享一个基因组，即一个有机体只有一个确定的基因组。 但基因组内各个基因的表达条件、程度都要随时间、地点、环境的不同而不同。所以，蛋白质组是一个动态的概念。 体现生命的复杂性 HGP表明：30亿对碱基，仅编码2.6-3.9万个不同的基因。人类的复杂性体现在表达产物的复杂性，即蛋白质的复杂性。 证 明 ★一个基因并不只存在一个相应的蛋白质，可能有几个或几十个。 ★基因也不能直接决定一个功能蛋白。 ★很多疾病并不完全是因为基因改变所造成，基因的表达方式错综复杂。 ★同一个基因在不同的条件下，可能会起到完全不同的作用。 ★基因不能完全决定蛋白质后期加工、修饰及转运定位的全过程。 目的基因的分离与合成 真核细胞的克隆载体 SV40(猴肾病毒)载体 穿梭载体 反转录病毒载体 人工染色体 酵母人工染色体 （yeast artificial chromosome,YAC） 细菌人工染色体（BAC） 噬菌体人P1衍生的人工染色体（PAC） 哺乳动物人工染色体（MAC） 连 接 方 法 1.粘性末端的连接 (cohesive end ligation　) 2.同聚体加尾部连接 (homoploymeric tails ligation) 3.人工接头法 (artificial linker ligation) 转化： 1)CaCl2处理后的转化 2）电击法 转染： 1)CaCl2处理后的转染 2）电击法 3) 其他方法：（1）聚乙二醇介导的转染法 （2）磷酸钙-DNA共沉淀法 （3）二乙胺乙基-葡聚糖介导的转染 （4）原生质体融合 （5）脂质体法 （6）细胞核的显微注射法 一、根据载体的性状变化进行筛选 1.抗药性标志筛选 2.抗药性标志插入失活 3.根据外源DNA片段性状筛选 4. β-半乳糖苷酶系统 二、根据重组DNA的结构特征进行筛选 1.重组DNA的快速裂解与鉴定 2.限制性内