酶的分离技术摘要.ppt

酶法分析：用酶进行物质分析检测的方法称为酶法检测或酶法分析。 酶法分析包括两个步骤： 1.酶反应：将酶与样品接触，在适宜的条件下（T、pH、抑制剂和激活剂）进行催化反应。 2.检测：测定反应前后物质的变化情况，底物的减少或产物的增加。 化学检测法 光学检测法 气体检测法 一、单酶反应检测 利用单一种酶与底物反应，然后用各种方法测出反应前后物质的变化情况。　 举例：L-谷氨酸脱羧酶 L-谷氨酸 γ-氨基丁酸 CO2 酶：游离或固定化 CO2检测：华勃氏呼吸仪或二氧化碳电极 二、多酶偶联反应检测 利用两种或两种以上的酶的联合作用，使底物通过两步或多步反应，转化为易于检测的产物，从而测定被测物质的量。　 举例：葡萄糖氧化酶与过氧化物酶 葡萄糖+O2 葡萄糖酸＋H2O2 CO2 H2O2 H2O＋［O］ ［O］＋还原型邻联甲苯胺 氧化型邻联甲苯胺 三、酶标记免疫反应检测 酶标抗原 ＋ E E 酶标抗体 ＋ E E 酶－抗原－抗体复合物 ＋ E E 举例：碱性磷酸酶 硝基酚磷酸 硝基酚＋ 磷酸 E A420 * * * * * * * * * 酶蛋白的肽链被水解后，可能出现以下三种情况中的一种： 1 引起酶活性中心的破坏，酶失去催化功能。 2 仍维持活性中心的完整构象，保持酶活力。 3 有利于活性中心与底物结合并形成准确的催化部位，酶活力提高。 氨基酸