基因定点突变技术概述.ppt

基因定点突变技术 袁莎 定点突变 定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。 基因的体外定向突变 在DNA水平上产小多肚编码顺序的特异性改变称为基因的定向诱变。利用这项技术一方面可对某些天然蛋白质进行定位改造．另一方向还可以确定多肽链中某个氨基酸残基在蛋白随结构坟功能上的作用．以收集有关氨基酸残基线件序列与其空间构象及生物活性之间的对应关系．入设汁制作新则的突变蛋白提供理沦依据。 基因突变技术 1 局部随机掺入法 2 碱基定点转换法； 3 部分片段合成法 4 引物定点引入法 5 PCR扩增突变法 局部随机掺入法 将待突变的靶基因克隆在一个载体质粒的特定位点上,其上游紧接着两个酶切位点RE1和RE2,它们分别能产生5’和3’突出的单链就性末端。用大肠杆菌核酸外切酶Ⅲ(ExoⅢ)末端特异性降解经RE1和RE2双酶切开的重组质粒3’凹端，并通过酶解反应时间控制新生成的单链区域大小(单链区域越短，突变精度越高)。终止反应后，单链区域用Kle-now酶补平，随后再用S1核酸酶处理单链末端，并以T4DNA连接酶连接成环。重组