基因工程在环境污染治理中的应用概述.pptVIP

原核生物目的基因的获得 基因库的构建：将总DNA酶解获得包含所有基因的DNA片段集，将每一个片段与载体连接并分别导入受体细胞，可得到所有的包含该生物体全套基因的库 基因文库的筛选 通过免疫反应筛选 通过DNA分子杂交筛选 真核生物目的基因的获得 cDNA文库的建立：细胞全部mRNA逆转录成cDNA并被克隆的总和 基因组DNA文库及cDNA文库组建图 DNA的化学合成：把新的脱氧核糖核苷酸加到DNA双链的5’端，与细胞中DNA分子合成的方向相反；目前常用的是磷酰胺法 PCR法：体外通过酶促反应快速扩增特异DNA片段 有与被分离的目的基因两条链各一端序列互补的DNA引物 具有热稳定性的酶 dNTP作为底物 有作为模板的目的DNA序列 目的基因的转移 重组DNA进入受体的过程叫转化，得到重组DNA的细胞叫受体细胞 选择合适的受体细胞：转化效率高、稳定传代、易筛选、外源基因可高效表达和稳定积累；原核生物如大肠杆菌，真核细胞如酵母菌和枯草芽孢杆菌 选择合适的载体：具有强启动子、便于连接、适合受体细胞 选择合适的导入方法：氯化钙导入法、电穿孔法、噬菌体导入法、其他方法 重组体的筛选 传统生物学方法 遗传学方法：抗性筛选——插入失活检测，直接筛选；营养缺陷互补筛选——蓝白筛选 免疫学方法：有目的蛋白的抗体 利用噬菌斑筛选 核酸杂交法：利用放射性同位素标记的