the special topic of amino acid extraction constant 分子生物学课件.ppt

* * * 蛋白质一级结构测定前的准备工作：Ⅳp105、Ⅲp96 样品的纯度在97％以上； 测定蛋白质的相对分子量； 测定肽链的数目； 测定氨基酸的组成——小片段重叠的原理 蛋白质一级结构的测定步骤： 1、末端分析 N－末端测定 Sanger法 Edman法 DNS法 氨肽酶法 C－末端测定 肼解法 羧肽酶法 2、肽链的拆开与分离 －S－S－：过甲酸或巯基乙醇等巯基化合物 非共价键：尿素、盐酸胍等蛋白质变性剂 3、肽链的部分水解和肽段的分离纯化 CNBr：专一裂解Met－COOH端肽键 蛋白酶：Ⅳ见p108表3-13，Ⅲ见 。 幻灯片 6、二硫键位置的确定 4、肽段的氨基酸序列测定 Edman降解法（氨基酸自动分析仪） 5、找“重叠肽”，从而推断氨基酸序列 例题详解 Sanger反应测定蛋白质N末端 （黄色） 混合氨基酸 Edman反应测定蛋白质N末端： 此法能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸 残基逐一进行标记和解离。 PTH-AA （荧光） 丹磺酰氯反应测定蛋白质N末端 少1氨基酸蛋白质 肼解法测定蛋白质C末端 Rn≠ Pro Rn-1或/和Rn＝Leu,Phe,Trp,Tyr 胃蛋白酶 Rn≠ Pro 热稳定 Rn-1＝疏水性氨基酸 Leu,Ile,Met,Val,Phe,Trp,Tyr 噬热菌蛋白酶 Rn≠