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实验室流程.doc
实验室操作流程
收集完标本之后实验室检测分两个部分完成，一 提取DNA；二 基因检测
一 提取DNA部分
目前我们常用的标本有三种：口腔拭子、FTA卡和血液标本，如下图所示：
口腔拭子 FTA卡 血液标本
针对以上三种标本，提取DNA具体流程操作如下：
1 口腔拭子DNA提取标准化操作
1.1核对样品记录与样品编号，确定样品编号与样品记录是否相符样品编号是否,只有唯一编号的样品才能用于实验。将选取的样按照编号的顺序依次放置在试管架上。取1.5mLEppendorf离心管，Kit吸附柱CR收集管(2ml)，依次放置在试管架上，与一一对应，并在离心管上用记号笔标上对应样的号码。
1.4 将口腔拭子样1.5mLEppendorf离心管
1.5 每管加入20ul蛋白酶K溶液,离心10秒混匀,室温放置5分钟,56℃放置60分钟,期间每15分钟震荡混匀数次。
1．6每管加入400ul缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10分钟,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
1.7 每管加200ul无水乙醇,充分颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
1.8将上一步所得溶液用移液器转移至已经标好编号的CR2中,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
1.9 向吸附柱CR2中加入500ul缓冲液GD,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
1.10 向吸附柱CR2中加入700ul漂洗液PW, 12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放回收集管中。
1.11 向吸附柱CR2中加入500ul漂洗液PW, 12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
1.12 将吸附柱CR2放回收集管中, 12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟,倒掉废液,将吸附柱CR2室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
1.13 将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加25ul洗脱液TB,室温放置2-5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟。
2 FTA卡DNA提取标准化操作
2.1核对样品记录与样品编号，确定样品编号与样品记录是否相符样品编号是否,只有唯一编号的样品才能用于实验。将选取的样按照编号的顺序依次放置。 2.3 取1.5mLEppendorf离心管，Kit吸附柱CR收集管，依次放置在试管架上，与一一对应，并在离心管上用记号笔标上对应样的号码。1.5mL离心管正上方打下直径6mm的圆片，放置到离心管
2.5 每管各加入400ul缓冲液GA。
2.6 每管加入20ul蛋白酶K溶液,涡旋10秒混匀,室温放置5分钟,56℃放置60分钟,期间每15分钟涡旋混匀数次。
2.7每管加入400ul缓冲液GB,充分颠倒混匀,70℃放置10分钟,此时溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
2.8每管加200ul无水乙醇,充分颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
2.9 将上一步所得溶液加入已经标好编号的CR2中,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
2.10 向吸附柱CR2中加入500ul缓冲液GD,12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
2.11 向吸附柱CR2中加入700ul漂洗液PW, 12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
2.12 向吸附柱CR2中加入500ul漂洗液PW, 12,000rpm(~13,400×g)离心30秒,倒掉收集管中的废液,将吸附柱CR2放会收集管中。
2.13 将吸附柱CR2放回收集管中, 12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟,倒掉废液,将吸附柱CR2室温放置数分钟,以彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
2.14 将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中,向吸附膜中间位置悬空滴加25ul洗脱液TB,室温放置2-5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2分钟。
3 血液基因组DNA提取标准化操作
3.1核对样品记录与样品编号，确定样品编号与样品记录是否相符样品编号是否,只有唯一编号的样品才能用于实验。将选取的样按照编号的顺序依次放置在试管架上。取1.5mLEppendorf离心管，Kit吸附柱C收集管(2ml)，依次放置在试管架上，与一一对应，并在离心管上用记号笔标上对应样的号码。1.1 按照表格在1.5ml/0.2ml离
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