胡萝卜肉质根细胞的悬浮培养和不定芽的诱导(实验)介绍.docVIP

本科学生综合性实验报告 学号 114120*** 姓名 @ % 学院 生命科学学院 专业、班级 11应用生物教育#班 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 龙 维 彪（讲师） 开课学期 2013 至 2014 学年 下 学期 填报时间 2014 年 6 月 10 日 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案 实验序号 三 实验名称 胡萝卜肉质根细胞的悬浮培养和不定芽的诱导 实验时间 2014.5.12——2014.6.6 实验室 睿智楼3幢325 实验内容： 3-1 胡萝卜愈伤组织的增殖培养 3-2 胡萝卜细胞悬浮培养基和不定芽分化培养基的配制 3-3 胡萝卜细胞悬浮培养和不定芽分化 1．实验目的： 1)、通过本次实验，为细胞的悬浮培养提供充足的色泽新鲜、生长速度快、质地疏松的愈伤组织； 2）、学会设计适合胡萝卜细胞悬浮培养和不定芽分化的培养基，为胡萝卜细胞悬浮培养和不定芽分化提供适合培养基； 3）、掌握细胞悬浮培养的基本操作技术、不定芽分化的原理以及不定芽诱导的方法。 2． 实验原理、实验流程或装置示意图 实验原理 1）、将继代一次的胡萝卜愈伤组织选择生长状态良好、色泽新鲜未褐化的部分转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖[1]。 2）、一般情况下，适合于愈伤组织增殖的培养基也适合于细胞的悬浮培养，只是要把琼脂去掉。 3）、影响茎芽分化因素主要是培养基中生长素和细胞分裂素的浓度和比例。当生长素的相对浓度较高时，有利于细胞的增殖和根的分化，若细胞分裂素的相对浓度较高，则促进芽的分化，当这两种激素之间的比例适中时[2]，则仍产生无结构的愈伤组织。 4）、将实验3-1建立的生长状态良好、色泽新鲜、结构松散的胡萝卜肉质根愈伤组织转接到胡萝卜细胞悬浮培养基中，于25 ℃、全黑暗、摇床上震荡培养[3]，即可分离得到单细胞，进一步可建立胡萝卜细胞悬浮培养系。 5）、将实验3-1建立的生长状态良好、色泽新鲜、结构紧密的胡萝卜肉质根愈伤组织转接到胡萝卜不定芽分化培养基上，置于温度25 ℃ 、光照时间14 h/d、光照强度1000~2000Lx条件下即可分化再分化成苗（或丛芽）。 实验流程 3．实验设备及材料 1）、实验用具和仪器 冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、封口膜、橡皮筋/棉线、酒精棉球、小块纱布、已灭菌培养皿和滤纸、枪状镊子、解剖刀、酒精灯、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台等。 2）、药品和试剂： MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、愈伤组织继代培养基、75％酒精、胡萝卜细胞悬浮培养基、胡萝卜不定芽分化培养基。 3)、材料： 胡萝卜肉质根愈伤组织 4．实验方法步骤及注意事项 实验步骤： Ⅰ、胡萝卜愈伤组织的增殖培养 （1）、准备工作 ①接种室的清洁和消毒；②超净工作台的开机和消毒；③解剖刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；④实验材料的准备（选择无污染、愈伤组织生长状态良好、色泽新鲜的材料摆放于净工作台上）。 （2）、愈伤组织增殖培养 将实验1建立的生长状态良好、色泽新鲜未褐化的胡萝卜肉质根愈伤组织转接到愈伤组织增殖培养基上，放置在25 ℃全黑暗条件下进行愈伤组织的增值培养[4]，以获得足够数量、质地良好的愈伤组织，作为胡萝卜细胞悬浮培养的实验材料。 （3）、培养结果 文字描述配合图片记录培养结果 Ⅱ、胡萝卜细胞悬浮培养培养基和不定芽分化培养基的配制 （1）、胡萝卜细胞悬浮培养培养基和不定芽分化培养基的配方及体积 ①胡萝卜不定芽分化培养基 配方： MS＋0.1mg/L NAA ＋ 1mg/L 6-BA ＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖，pH5.8 配制体积：每小组配制0.5L，用50ml三角瓶分装成20瓶，每人2瓶。 ②胡萝卜细胞悬浮培养培养基 配方： MS＋1mg/L 2,4-D ＋ 0.5mg/L 6-BA＋200mg/L水解酪蛋白＋3％蔗糖，pH5.8 配制体积：每小组配制0.5L，用100ml三角瓶分装成20瓶，每人2瓶。 （2）、胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制 ①药品及用具的准备；②培养基配制；③调节培养基的酸碱性至pH5.8；④培养基的分装；⑤培养基的灭菌。 Ⅲ、胡萝卜细胞悬浮培养和不定芽分化 （1）、准备工作 ①接种室的清洁和消毒；②超净工