Folin-Wu法测血糖3.docVIP

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 颜晓佳 学 号 20070004011 专 业 综合理科二班 年级、班级 07级 课程名称 生物化学实验 实验项目 Folin-Wu法测血液葡萄糖含量 实验类型 □验证 □设计 □综合 试验时间 2008 年 11 月 10 日 实验指导老师 陈文利/徐杰 实验评分 实验目的：学习使用Folin-Wu法测血液中血糖的含量 实验原理： 葡萄糖的半缩醛基具有还原性，在加热情况下可以使碱性铜试剂中的Cu2+还原成黄色的氧化亚铜沉淀，而本身被氧化成羧基。氧化亚铜可使磷钼酸还原成蓝色的钼蓝，蓝色的深度与葡萄糖的浓度成正比，故可用比色法测定钼蓝的光吸收值来测定葡萄糖的浓度。 3Cu2O+2MoO3→6CuO+Mo2O3（钼蓝） 血糖即指血液中存在的葡萄糖。由于血液中成分复杂，尤其有许多种蛋白质存在，它们对血糖的测定会产生干扰。因此，目前常用钨酸法处理抗凝血来制备无蛋白滤液，然后用来测定无蛋白滤液中的葡萄糖含量。 Na2WO4+H2SO4→H2WO4（钨酸）+Na2SO4 在测定过程中，由于空气中的氧对Cu2O会产生再氧化作用从而影响测定结果，因此实验中要采用特制的福林—吴宪血糖管——有一细颈，可以尽量减少与空气的接触 实验材料：饥饿16h的鸡 实验试剂：1.草酸钾 2. 0.25%苯酸甲溶液 3.10%钨酸钠溶液 4.mol/L硫酸溶液 标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml) 碱性铜试剂：分别秤取40g无水Na2SO4、7.5g酒石酸、4.5g硫酸铜晶体，用蒸馏水溶解后混合，定容至1000ml。 磷钼酸试剂：秤取70g钼酸、10g钨酸钠，量取10%氢氧化钠400ml及蒸馏水400ml，于烧杯中混合加热20-40min（出去钼酸中的杂质——氨），冷却后加入85%磷酸250ml，混匀后定容至1000ml。 实验器具：1.试管与试管架 2.玻璃棒 血糖管 4.小漏斗 可见光分光光度计 6.电炉 7.移液管 8.水浴锅 操作步骤： 制备无蛋白液 用移液管吸取已加抗凝剂的全血5ml，擦去移液管外血液，之后将血液缓缓放入含7.5ml蒸馏水的试管底部，并吸取试管内蒸馏水吹洗试管数次。摇匀，血液变成红色透明。再加 mol /L 硫酸1ml，溶液变成黑色，摇匀并静置5min。再加10％钨酸钠1ml，随加随摇，溶液出现了棕色沉淀（这时候可用玻璃棒搅拌），随后静置5min。滤纸过滤，得到的清液（无蛋白血液）相当于稀释了20倍的全血（每ml溶液含0.05ml全血)。 血糖的测定 试剂（ml） 血糖管 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 2 无蛋白血液 2 标准葡萄糖液 2 碱性铜试剂 2 混匀，沸水浴中煮8min，勿摇动取出，流水冷却 现象 蓝色 黄绿色++ 黄绿色+ 磷钼酸 2 蒸馏水 19 现象 无色透明 钼蓝色++ 钼蓝色+ A620 1 0.000 0.458 0.264 2 0.000 0.457 0.263 平均值 0.000 0.458 0.264 标准管和测定管中的葡萄糖半缩醛基先把碱性铜试剂还原成黄绿色的Cu+；当加入磷钼酸的时候，发生3Cu2O+2MoO3→6CuO+Mo2O3反应，出现钼蓝色溶液，且颜色的深浅与溶液中葡萄糖含量的多少成正比。 血糖浓度的计算 ∵血糖浓度与钼蓝色的深度成正比∴根据，可以得到，再将0.115×100=11.5mg得到每100ml含葡萄糖11.5mg/100ml；又∵加入了2ml的无蛋白血液，相当于含有0.1ml的全血，∴再将11.5mg÷0.1=115mg/100ml表示每100ml全血中含有115mg的葡萄糖。 实验注意事项： 过滤时要在漏斗上盖上一个表面皿，防止水分蒸发。 血糖还原碱性铜试剂的反应要在血糖管中进行，防止空气中的氧化剂将Cu2O氧化，而降低Mo2O3的量，从而导致比色吸光值的减小。 吸取血液时要注意擦干外壁血液，同时要将内壁的血液洗进试管中。 实验总结： 动物血液要选择饥饿处理过的动物血液，以免刚进食的动物血糖浓度过高导致测量不准 比色测定有几种方法： ①标准曲线法 ②标准系数法 ③标准管法（本实验所采取的方法） ④回归分析法 3.医院测血糖的方法：采取指尖l滴毛细血管全血.置于特别的试纸上，再让便携式血糖测定仪检测，约需15-45秒钟(生产厂家不同，所需时间