2015.3.9基因工程胶印技术方案.doc

东平明湖中学高三（艺体生）生物学案 班级： 姓名： 得分： 课题 第1讲　基因工程与蛋白质工程 编号 1 课型 复习课 主备人 杜广利 审核人 张慧 李桂梅 韩会林 审批人 使用时间 2015/3/9 批阅时间 教师寄语：如果给我们一个支点，我们可以撬起整个地球。 复习目标 考纲展示 考纲解读 1.基因工程的诞生(Ⅰ) 2．基因工程的原理及技术(Ⅱ) 3．基因工程的应用(Ⅱ) 4．蛋白质工程(Ⅰ) 1.了解基因工程诞生的历程。 2．了解基因工程的工具及其作用；说明基因工程的原理和操作步骤。 3．概述基因工程在农牧业、医药卫生等方面的应用实例。 4．简述蛋白质工程的基本原理及其与基因工程的区别。 考查热点：探针（放射性同位素和荧光分子标记的目的基因的一条链），标记基因（如抗生素抗性基因，如四环素抗性基因，氨苄青霉素抗性基因，卡那霉素抗性基因） 考点　基因工程的工具1、基因工程的操作工具 （一）限制性核酸内切酶 识别的序列的特点：呈现两侧碱基互补对称， DNA分子时，被破坏的是DNA链中的磷酸二酯键（即连接相邻两个脱氧核苷酸的键）。 ②黏性末端是指双链DNA分子被限制酶切开后，切口处的两个末端伸出的由若干特定核苷酸组成的单链。 1.（2010天津理综）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答： （1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。 2．(2011年山东聊城高三一模)限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。如图为四种限制酶 BamHⅠ、EcoR I、Hind Ⅲ和BglⅡ的识别序列和切割位点。切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是(　　) Bam H Ⅰ　　Eco R Ⅰ　　Hind Ⅲ　　　Bgl Ⅱ ↓　　　　　↓　　　　　　　↓ 　　　↓ GGATCC　　GAATTC　　AAGCTT　　AGATCT CCTAGG　　CTTAAG　　TTCGAA　　TCTAGA 　　　↑　　　　　↑　　　　↑　　　　　　　↑ A．BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ B．BamH Ⅰ和Hind Ⅲ C．BamH Ⅰ和Bgl Ⅱ D．EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ 3．(2011年浙江)在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是(　　) A．用限制性核酸内切酶切割烟幕花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 ．(2011年海南单科)回答有关基因工程的问题： 构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割 DNA 后，可能产生黏性末端，也可能产生________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生________(相同、不同)黏性末端的限制酶。． DNA连接酶 作用底物 作用部位 作用结果 DNA连接酶 DNA分子片段 磷酸二酯键 形成重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 DNA复制 DNA连接酶有两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E·coli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的．称为T4 DNA连接酶。 E·coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。 而T4-DNA连接酶既可以连接双链DNA片段互补的黏性末端，又可以连接双链DNA片段的平末端，但连接平末端的效率较低 （三）．载体 (1)载体具备的条件 ①对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动； ②具标记基因，； ③能自我复制，通过复制进行基因扩增； ④具有多个酶切位点，供外源基因插入其中，而且每种酶切位点最好只有一个，避免酶切后环状DNA打开，丢失某些片段。 (2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 考点 二　基因工程的基本操作程序基因组文库基因组文库直接分离法直接分离法基因组文库）基因组文库 3.PCR技术扩增目的基因 注意：PCR技术中的Taq酶（热稳定的DNA聚合酶）；引物对 （1）PCR实质：DNA复制 （2）PCR过程：加热解链→冷却复性（引物与目的基因互补序列结合）→延伸。 第一步：加热至90～95℃DNA解链； 第二步：冷却