第八章荧光免疫技术教案.docVIP

第八章　荧光免疫技术第一节 概述 　　　　一、荧光的基本知识　　1、荧光 　　荧光就是某些物质受到一定波长光的激发后，在极短时间内发射出的波长大于激发光波长的光。 　　2、发射光谱 　　发射光谱是指固定激发光波长，在不同波长下所记录到的样品所发射的荧光强度。激发态电子回到的能级不同，发出的荧光波长就不同。 　　3、激发光谱 　　激发光谱是指固定检测发射光波长，用不同波长的激发光激发样品所记录到的相应的荧光发射强度。 　　4、荧光效率 　　荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率称为荧光效率。在一定范围内，荧光强度与激发光强度呈正相关，即激发光越强，荧光越强，但过强的激发光会使荧光很快褪去。 　　荧光效率=发射荧光的光量子数（荧光强度）/吸收光的光量子数（激发光强度）。　　5、荧光寿命 　　荧光物质被激发后产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间称为荧光寿命。 　　激发光消失，荧光现象随之消失，但各种荧光物质的荧光寿命不同，可利用延时测定的方法消除某些短寿命荧光的干扰，此为时间分辨荧光免疫测定的理论基础。 　　6、荧光淬灭 　　荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、酚、Ⅰ-、硝基苯等）作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。 　　7、荧光偏振 　　P=FH-FL／FH+FL　　式中：P表示偏振度,FH表示激发光起偏器和荧光检偏器的透射轴方向平