第十五章病毒病的分子生物学诊断教案.docVIP

第十五章　病毒病的分子生物学诊断 第一节　概述 由于分子生物学技术的飞速发展，病毒病的实验室诊断技术已从常规的病毒分离鉴定以及抗原和抗体的免疫学检测，进入到可对病毒基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平，包括对病毒核酸（DNA或RNA）和蛋白质分子的特异序列或结构。常用于病毒核酸序列和基因结构测定的分子生物学技术包括基因组电泳分析、DNA酶切图谱分析、寡核苷酸指纹图、核酸杂交、聚合酶链式反应（PCR）等，其中核酸杂交和PCR技术又以其特异、快速、敏感、适于早期和大量样品的检测等优点，成为当今病毒病诊断最具应用价值的方法。DNA杂交的敏感度已经提高到0.05 pg /(l水平，只要有1000个DNA拷贝就可被检测出来；PCR可以检测出一个拷贝的DNA分子。 分子生物学诊断的特异性取决于核酸序列的特异性。获取病毒特异DNA片段的基础是进行病毒基因的克隆，即首先建立易于获得足够量病毒DNA的病毒基因无性繁殖系。病毒基因克隆以后，就可以比较容易地用酶促法或化学法来测定其核苷酸序列，再将获得的序列输入计算机，与基因序列库中的已知序列进行比较分析，就能准确地定位病毒特异的基因序列。到目前为止，越来越多的病毒基因被克隆和测序，几乎涉及所有动物病毒科的成员，一些重要病毒的全基因序列已被测定，这无疑促进了病毒病分子生物学技术的发展。 第二节　病毒基因的克隆与鉴定 一、概述 病毒基因的克隆是在