阿魏酸酯酶的研究与应用分析.ppt

用电击法转化感受 态毕赤酵母GS115. 将转化的毕赤酵母涂 布于MD琼脂平板上 培养2 d 挑取单菌落, 在BMGY中培养1d 离心收集菌体 提取其基因组DNA 进行PCR验证 质粒转化情况 挑取质粒转化成 功的阳性菌落，在BMGY培养基中 培养2 d（30℃、200rmp) 离心收集的菌体 重悬于10 mL BMMY培养基 同样条件继续培养 3 d，每天补加50 μL 的甲醇 7.3酶活的快速检测 反应体系为1 mL，其组成为：100 μL体积10 mmol/L的阿魏酸对硝基苯酚酯的DSMO溶液，800 μL含有2.5% (V/V)的Triton X-100的0.1 mol/L磷酸钠缓冲液 (pH 6.4)和100 μL的酶溶液。 在40 ℃反应30 min后于410 nm波长处测定阿魏酸对硝基苯酚酯降解生成对硝基苯酚的吸光度，并计算出生成对硝基苯酚的浓度。 7.4部分实验步骤： 1、PCR扩增：（小试，共20μL） ①ddH2O 14.4μL 72 μL 10× PCRbuffer 2μL 10μL 引物1（10μM） 1μL 5μL 引物2（10μM） 1μL ×5 5μL 混匀分装19μL/管×5管 dNTP（10mM） 0.4μL 2μL 模板（原液40 ×稀释）1μL Taq酶 0.2μL 1μL 按顺序加入上述物质，最后加入Taq酶 ② PCR反应程序 94℃ 5min 94℃ 30s Tm 30s 26个循环 72 ℃ 1min 72 ℃ 10min 4 ℃ 保存 ③以上PCR产物跑琼脂糖凝胶（0.8%） 2、PCR扩增：（大试，共200μL） ①ddH2O 144μL 10× PCRbuffer 20μL 引物1（10μM） 10μL 引物2（10μM） 10μL 混匀分装40μL/管×5管 dNTP（10mM） 4μL 模板 10μL Taq酶 2μL 按顺序加入上述物质，最后加入Taq酶 ② PCR反应程序 94℃ 5min 94℃ 30s Tm 30s 30个循环 72 ℃ 1min 72 ℃ 10min 4 ℃ 保存 ③以上PCR产物跑琼脂糖凝胶（0.8%） 八、阿魏酸酯酶的研究现状及展望 到目前为止,阿魏酸酯酶的研究上已进行了一些卓有成效的工作。 首先,筛选了一批能高效分泌阿魏酸酯酶的微生物。 其次,对该酶的酶学特性进行了详细研究,如酶的结构、最适温度、最适pH值及影响酶稳定性的其他因素。 第三，探讨了阿魏酸酯酶与一些多糖降解酶的协同作用。 第四，探讨了微生物产酶的影响因素和酶的工业化分离方法。 但是，对阿魏酸酯酶的研究仍有很多工作要做。 第一，筛选出的分泌阿魏酸酯酶的微生物阿魏酸酯酶的分泌量仍然达不到工业化生产阿魏酸酯酶的要求，利用现代生物技术来改良微生物，使阿魏酸酯酶的产量提高是解决这一问题的根本途径，目前已经有研究者定位了与阿魏酸酯酶合成有关的基因，为进一步的研究奠定了基础。 第二，目前阿魏酸酯酶的应用还集中在食品行业，在造纸等行业上应用的研究还有待开展。 阿魏酸酯酶的研究与应用 随着全球人口和经济规模的不断增长，能源使用带来的环境问题及其诱因不断地为人们所认识，不止是烟雾、光化学烟雾和酸雨等的危害，大气中二氧化碳浓度升高将带来的全球气候变化，也已被确认为不争的事实。二氧化碳的释放很大部分是由于植物秸秆的燃烧。这不尽污染了环境而