1.1DNA重组技术的基本工具技术方案.ppt

质粒的特点: 1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2、质粒的存在对宿主细胞无影响； 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成（独立复制或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行同步复制。） 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 5. 下列关于DNA连接酶的叙述中，正确的是 （ ） A. DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 B. DNA连接酶连接的是黏性末端两条主链上的磷酸和脱氧核糖 C. DNA连接酶连接的是黏性末端两条主链上的磷酸和核糖 D. 同一种DNA连接酶可以切出不同的黏性末端 B 6. 实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。从大肠杆菌中提取的一种限制性内切酶EcorI，能识别DNA分子中的GAATTC序列，切点在G与A之间。这是应用了酶的 （ ） A.高效性 B.专一性 C.多样性 D.催化活性受外界条件影响 B 7. 下列有关质粒的叙述，正确的是（ ） A．质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器 B．质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNA分子 C．质粒只有在侵入宿主细胞后才能复制 D．细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行的 B 8. 关于右图DNA分子片段的说法正确的是（ ） A．限制性内切酶可作用于①部位，解旋酶作用于③部位 B．②处的碱基缺失导致染色体结构的变异 C．把此DNA放在含15N的培养液中复制2代，子代中含15N的DNA占3/4 D．该DNA的特异性表现在碱基种类和（A+T）/（G+C）的比例上 G A A T T C C T T A A G ① ② ③ A 15N 14N 9.不属于目的基因与运载体结合过程的是 ( ) A．用一定的限制酶切割质粒露出黏性末端 B．用同种限制酶切断目的基因露出黏性末端 C．将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处 D．将重组DNA引入受体细胞中进行扩增 D 教材P7思考与探究1 * The camelecow 重组DNA转移到动物受精卵中 将人的生长激素基因注射到小白鼠受精卵中，得到的“超级小鼠”。 转鱼抗寒基因的番茄 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 也叫基因拼接技术或DNA重组技术。该技术是在生物体外，通过对有关DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖（克隆），使重组基因在受体细胞内表达，从而创造出人类所需要的新的生物类型和基因产物。定向改造生物的遗传性状。 （一）基因工程的概念 什么叫基因工程？ 通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 原理 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的新的生物类型、基因产物 剪切 →拼接 →导入 →表达 基因重组 基因工程 抗虫棉 普通棉 我国拥有自主知识产权的转基因抗虫棉 “分子手术刀”——限制性内切酶 1、基因工程的 “ ” 1、来源： 主要是从原核生物中分离纯化出来的，切断外来的DNA ，在内部进行，故名限制性内切酶。 2、种类： 4000种 每种限制性内切酶只能识别某种双链DNA分子特定的核苷酸序列，并在特定的位点进行切割，使每一条链中两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(具专一性) 形成两种末端 黏性末端（碱基互补配对） 平末端 3、作用： 4、结果： T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A 举例： 大肠杆菌的一种ECORⅠ限制酶识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 C T T A A G 黏性末端 G A A T T C C T T A A G 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。