生物选修三重点分析.docVIP

一 PCR技术 1概念：在生物体外复制DNA片段的核酸合成技术。 2目的：短时间获得DNA片段（目的基因）。 3原理：DNA复制。 4条件：（与细胞内DNA复制比较） 细胞内DNA复制 PCR技术 模板 需要 需要 原料 四种脱氧核苷酸 dCTP dATP dGTP dTTP 能量 ATP提供 高能磷酸键提供 酶 解旋酶，DNA聚合酶等 耐高温的DNA聚合酶，如Taq酶 引物 需要引物：DNA聚合酶必须以一段具有3端自由羟基（3-OH）的RNA作为引物，才能开始聚合子代DNA链。RNA引物的大小，在原核生物中通常为50～100个核苷酸，而在真核生物中约为10个核苷酸。 人工合成的DNA片段做引物 5过程： 1）DNA复制的一个复制叉 2）PCR三步 变性 复性 延伸 结论：①第3轮出现相同的DNA片段；②多轮后最短的DNA片段数量最多。 二 基因表达载体的组成 1 目的基因：合成特定的蛋白质； 2 复制原点：重组DNA能自我复制，随着细胞的分裂遗传给子代细胞； 3 启动子：特殊结构的DNA片段，作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录； 4 终止子：特殊结构的DNA片段，作用是让转录停止； 5 标记基因：抗性基因或荧光蛋白基因，方便鉴定、筛选目的基因是否导入成功。 拓展：① 标记基因一般为运载体提供； ② 启动子和终止子可以是目的基因自带（从基因组文库中获取的目的基因含有），也可以是运载体提供（cDNA和人工合成的目的基因中没有）； ③ 起始密码子、终止密码子是mRNA上3个连续的碱基，与启动子、终止子不同。 三．基因工程载体的构建需要考虑哪些方面的因素？道理何在？ （1）基因的特点：如果一个来自动物的目的基因含有内含子，就不能用于转基因植物，因为动物中内含子的剪接系统与植物的不同，植物不能将动物基因的内含子剪切掉，只能用该基因的cDNA。基因的产物如果是一个糖蛋白，那么该基因在原核生物细菌中表达出来的蛋白就可能不具备天然状态下的活性，因为糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加上的，而细菌无这些细胞器。 （2）要选择强启动子或组织特异性启动子。启动子有强有弱，选择强启动子可以增加转录活性，使基因产物量增多。如果希望基因在生物的某个组织表达，如只在植物种子中表达，就要选择种子中特异表达的启动子。 （3）要有选择标记基因，如抗生素基因，以便选择出真正的转基因生物。 例.（10天津14分）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答： （1）图中将人乳蛋白基因插入载体，需用 限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含 的培养基上进行。 （2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是 （填字母代号）。 A.启动子 B. tetR C.复制原点 D. ampR （3）过程①可采用的操作方法是 （填字母代号）。 A.农杆菌转化 B. 大肠杆菌转化 C.显微注射 D. 细胞融合 （4）过程②可采用的生物技术是 。 （5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的 性。 （6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用 （填字母代号）技术。 A.核酸分子杂交 B. 基因序列分析 C.抗原—抗体杂交 D. PCR 4 ．（1）HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 （2）A （3）C （4）胚胎移植技术 （5）全能 （6）C 例．(2009年福建理综)转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有Pst Ⅰ、Sma Ⅰ、EcoR Ⅰ、Apa Ⅰ等四种限制酶切割位点。请回答： (1)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶____________，对_______________进行切割。 (2)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有________，作为标记基因。 (3)香蕉组织细胞具有________，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的________________________________。 5．(1)PstⅠ、EcoRⅠ　含抗病基因的DNA、质粒　(2)抗卡那霉素基因　(3)全能性　脱分化、再分化 四．什么是电泳 在外加直流电源的作用