骨髓间充质干细胞治疗急性肺损伤实验研究.pdfVIP

!璺坠塑垦壁盔兰堡!：塑壅兰堡兰 三 骨髓间充质干细胞治疗急性肺损伤的实验研究 摘 要 急性肺损伤(acute lung respiratory injury,ALl)，急性呼吸窘迫综合征(acute distress 是ARDS的前期。ALI，ARDS的主要病理改变是弥漫性的肺泡．毛细血管膜的损伤， 可由严重感染、创伤、休克、酸中毒及有害气体吸入等多种因素引起，临床表现为呼 吸窘迫和顽固性低氧血症11】a除机械通气外，目前对ALI／ARDS的治疗仍缺乏有效的 手段。寻找新的治疗措施是且前AU，ARDS研究中的重点。 上世纪九十年代以来，干细胞研究领域取得了一系列突破性进展，为利用干细胞 修复组织损伤，治疗一些疑难和复杂疾病提供了可能性。文献相继报道了干缅胞在治 疗心力衰竭、糖尿病等方面的一些进展田，展示了其作为一种新型治疗手段的良好前 景。干细胞是一类具有无限自我更新能力和多向分化潜能的细胞翻，按发生学来源可 stem sterncell)。 cell，ESC)和成体干细胞(somatic 分为胚胎干细胞(embryonic 成体干细胞存在于机体的各种组织器官中，在病理状态或外因诱导下可以表现出不同 程度的再生和更新能力。某些情况下，成体于细胞表现出很强的跨系或跨胚层分化潜 能，即具有。可塑性(plasticity)郴¨儿。 stem 骨髓(bone cells，MSCs)属于 marrow)问充质干细胞(mesenchymal 成体干细胞，目前报道它具有向成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、上皮细胞、内 皮细胞、心肌细胞甚至肝脏细胞和神经细胞等方向分化的多种潜能is]。而且骨髓间充 质干细胞通过骨髓吸取就可以得到，取材容易，并在体外有很大的扩增潜甜”，因此 利用MSCs治疗疾病具有突出的优点。 性肺损伤中的作用，主要进行了以下几方面的工作： 1．小鼠骨髓问充质干细胞的分离、培养和鉴定。取小鼠后肢股骨和胫骨，吸取骨髓 进行全骨髓培养，得到MSCs，并做细胞免疫化学染色，检测MSCs特异表面标 记。 2．建立LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型。利用小鼠咽后壁吸入LPS的方法造成小 鼠肺损伤；称重计算肺水肿指数；肺组织切片HE染色观察组织病理改变；ELISA 中国协和医科大学硕L研究生论文 4 检测肺泡灌洗液和肺组织匀浆中lL．1 B含量。 3．供体骨髓间充质干细胞的移植和效果评价。将供体MSCs用Brdu标记后行免疫 细胞化学染色，观察细胞核中Brdu标记效果；将标记过的MSCs制成细胞悬液， 通过尾静脉移植入肺损伤小鼠体内，移植后4天做肺组织切片进行免疫组织化学 染色及双染色观察移植细胞的植入和分化状态；检测肺水肿指数，肺泡灌洗液和 肺组织匀浆中IL-1p含量。 结果表明： 1、培养的MSCs细胞多呈集落样生长，体积较小，成梭形或柳叶形，细胞核明显， 核浆比大。细胞免疫组织化学染色显示，表面标记CD44阳性，而造血系表面标 记CD34阴性。 2、吸入LPS后，小鼠出现典型的肺损伤病理改变，炎症细胞浸润，肺泡间隔增厚， 毛细血管充血，肺泡内可见透明膜形成，严重者肺泡正常结构消失。损伤小鼠肺 水肿指数和肺组织匀浆lL-18含量明显增加。 示标记的细胞出现Brdu阳性；标记的MSCs移植入同种异体的小鼠肺损伤模型 内，小鼠肺部出现外源性MSCs，这些细胞表现出上皮细胞表型，免疫组织化学 CK)。治疗后小鼠与治疗前相比，肺水肿指数和